酸性肽對AD大鼠腦中NGF、Aβ、NMDR1、mGluR2，3表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的：阿爾茨海默病(Alzheimer’sDisease，AD)是一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，以進(jìn)行性學(xué)習(xí)記憶、認(rèn)知功能減退為主要臨床癥狀，以老年斑、神經(jīng)纖維纏結(jié)、神經(jīng)元丟失為主要病理特征。雖然對本病的研究越來越深入，提出了多種假說，包括基因?qū)W說、膽堿能異常學(xué)說、代謝障礙學(xué)說、自由基與凋亡學(xué)說、興奮性氨基酸毒性學(xué)說等，但這些學(xué)說均不能完全闡明AD的發(fā)病機(jī)制，由于缺乏有效的早期診斷方法和治療手段，在發(fā)達(dá)國家AD已成為繼心臟病、癌癥、中風(fēng)

2、之后第四位導(dǎo)致成人死亡的疾病，因此積極開展對AD的研究已十分重要。 Meynert基底核(nucleusbasalisofMeynert，nbM)位于前腦基底部，nbM中的神經(jīng)元主要是膽堿能神經(jīng)元，曲M發(fā)出的神經(jīng)纖維投射到大腦皮質(zhì)廣泛區(qū)域及海馬等部位。興奮性氨基酸鵝膏蕈氨酸(Ibotenicacid，IBO)是一種NMDA(N甲基-D-天門冬氨酸)受體激動劑，具有強(qiáng)烈的神經(jīng)興奮毒性作用，能持久且穩(wěn)定地?fù)p害動物的學(xué)習(xí)和記憶。用mO

3、損毀大鼠曲M，能導(dǎo)致膽堿能神經(jīng)元潰變，神經(jīng)團(tuán)面積變小，細(xì)胞突起數(shù)量明顯減少，可作為較理想的AD動物摸型。 神經(jīng)肽在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)分布廣泛，是神經(jīng)信息傳遞和調(diào)控的重要信息物質(zhì)，參與機(jī)體多種功能的調(diào)節(jié)。安玉會等對牛腦中小分子肽進(jìn)行了分離研究，在國際上首次分離出了一種新的酸性肽(acidicpeptide，AP)，該肽為小分子肽，無抗原性。已有研究表明：①AP可升高腦內(nèi)氨基酸的水平，并對腦內(nèi)鳥環(huán)核苷酸(cGMP)濃度的變化有一定影響。

4、②通過增加腦內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，提高腦內(nèi)抗氧化能力，減少腦內(nèi)一氧化氮(NO)的生成，改善腦內(nèi)能量代謝障礙，在動物整體水平上對AD大鼠模型有良好的治療效果。③酸性肽無致突變性，但有抗突變性，并能通過血腦屏障。 本試驗擬采用大鼠腦組織立體定位微量注射技術(shù)，IBO損毀大鼠雙側(cè)nbM，建立AD動物摸型，然后系統(tǒng)研究了不同劑量AP對AD大鼠的作用。通過測定與學(xué)習(xí)記憶有關(guān)的行為學(xué)指標(biāo)及腦內(nèi)與AD相關(guān)的NGF、NMDARl、Ap、mGluR2和m

5、GluR3水平的變化，進(jìn)一步探討AP對AD大鼠的作用機(jī)理，為揭示AD的發(fā)病機(jī)制和研制治療AD的新藥積累有價值的基礎(chǔ)研究資料。 材料與方法：雄性SD大鼠，8～12周齡，體重170～210克，共70只，由河南省實驗動物中心提供。隨機(jī)分成7組，每組10只。采用大鼠腦組織立體定位微量注射技術(shù)，用IBO損毀大鼠雙側(cè)曲M，建立AD動物模型。I組為正常對照組，H組為AD模型組，III組為AD模型+生理鹽水組，Ⅳ組為AD模型+谷氨酸O．3g/k

6、g治療組，V組為加模型+AP15mg/kg治療組(AP由本實驗組提供)，Ⅵ組為AD模型+AP3mg/kg治療組，Ⅶ組為AD模型+AP60mg/kg治療組。手術(shù)后連續(xù)灌胃20天，每天1次，每次2ml。灌胃期滿后即做迷宮實驗實驗以測學(xué)習(xí)、記憶能力。然后將大鼠斷頭取腦，PBS沖洗，多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片，依照免疫組化、原位雜交試劑盒操作步驟測定NGFR、NMDARl、Aβ及mGluR2，3。用SPSS11．O軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，試驗數(shù)據(jù)

7、用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x士s)表示，多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析，以α=0．05作為有顯著性的檢驗水準(zhǔn)。 結(jié)果：1．與正常組比較：①模型組、生理鹽水組、谷氨酸治療組及AP各濃度治療組的學(xué)習(xí)記憶能力均顯著下降(PO．05)。③模型組、生理鹽水組、谷氨酸組

8、及AP低濃度治療組大腦皮層NMDARl、Aβ顯著升高(PO．05)。④模型組、生理鹽水組、谷氨酸組及AP各濃度治療組大腦皮層mGluR2和mGluR3的表達(dá)均顯著下降(PO．05)；AP中、高濃度治療組的學(xué)習(xí)記憶能力均顯著升高(P

9、)。②生理鹽水組、谷氨酸組及AP低濃度治療組基底前腦NGF的含量均無明顯改變(P>O．05)；AP中、高濃度治療組基底前腦NGF的含量均顯著升高(P<0．01)。③生理鹽水組、谷氨酸組及AP低濃度治療組大腦皮層NMDARl、Ap無明顯改變(P>O．05)；AP中、高濃度治療組大腦皮層的NMDARl、Aβ顯著降低(P<0．01)。④生理鹽水組、谷氨酸組及AP各濃度治療組大腦皮層mGluR2和mGluR3的表達(dá)無明顯改變(P>O．05)。

10、 3．與谷氨酸治療組比較：①AP低濃度治療組的學(xué)習(xí)記憶能力無明顯改變(P>O．05)；AP中、高濃度治療組的學(xué)習(xí)記憶能力均顯著升高(PO．05)；AP中、高濃度治療組基底前腦NGF的含量均顯著升高(P0．05)；AP中、高濃度治療組大腦皮層NMDAR1、AB顯著降低(P

11、 4．AP各濃度治療組之間比較：①AP高、中濃度治療組的學(xué)習(xí)和記憶能力明顯高于AP低濃度組(P0．05)。②AP中、高濃度治療組基底前腦NGF的含量明顯高于低濃度組(P0．05)。③AP中、高濃度治療組大腦皮層NMDARl、AB明顯低于AP低濃度治療組(P<0．05)；AP中、高濃度治療組大腦皮層

12、NMDA受體、AB之間無顯著性差異(P>O．05)。 結(jié)論：1．用IBO損毀大鼠雙側(cè)nbM，導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)記憶能力顯著降低，并造成與AD相似的腦中NMDARl、NGFR、Aβ、mGluR2和mGluR3的變化。據(jù)此可建立較理想的AD動物模型。 2．生理鹽水、谷氨酸、低濃度AP對AD模型大鼠無治療作用。 3．中、高濃度AP能明顯改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，對AD模型大鼠有良好的治療作用。 4. AP能上調(diào)大腦