hVEGF-,121--EGFP融合蛋白的表達(dá)、純化及功能鑒定.pdf

1、目的：用攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）報(bào)告基因的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子121（hVGF121）的真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMCs），觀察其表達(dá)，并檢測(cè)融合蛋白對(duì)細(xì)胞增殖和血管通透性的影響。 方法：擴(kuò)增已構(gòu)建的pEGFP-N2-hVEGF121重組質(zhì)粒，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染BMCs；熒光顯微鏡下觀測(cè)綠色熒光蛋白的表達(dá)；Western Blot檢測(cè)VEGF蛋白的表達(dá)；MTT實(shí)驗(yàn)和miles試驗(yàn)分別檢測(cè)融合蛋白對(duì)細(xì)胞增殖和血管通透性

2、的影響。 結(jié)果：pEGFP-N2-hVEGF121成功轉(zhuǎn)染入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，在熒光顯微鏡下可見強(qiáng)綠色熒光蛋白的表達(dá)，Westen Blot檢測(cè)到VEGF蛋白的表達(dá)。MTT試驗(yàn)證實(shí)融合蛋白刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖，與對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.05）。Miles試驗(yàn)證實(shí)融合蛋白能夠增加血管壁的通透性。 結(jié)論：重組質(zhì)粒pEGFP-N2-hVEGF121體外轉(zhuǎn)染入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后，目的基因能夠在細(xì)胞有效表達(dá)，檢測(cè)方法簡(jiǎn)