PTD-SARA融合蛋白的表達(dá)、純化及鑒定.pdf

1、目的：隨著對腎臟纖維化發(fā)生的分子機(jī)制逐漸深入，TGF-β1在腎臟纖維化發(fā)生過程中的核心地位已經(jīng)確立，采用多種手段阻斷TGF-β1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可以有效預(yù)防腎臟纖維化、緩解腎臟纖維化進(jìn)程。SARA是TGF-β1的促纖維化作用通路中重要下游分子Smad2和Smad3的結(jié)合蛋白，其羧基末端的第665-750aa的Smad結(jié)合作用域（SBD）與Smad2和Smad3結(jié)合可抑制Smad2和Smad3的磷酸化，抑制Smad2和Smad3與Smad4的

2、結(jié)合，從而抑制纖維化的發(fā)生。本項(xiàng)目根據(jù)以上理論和蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)的研究進(jìn)展，利用基因工程的方法在大腸桿菌中表達(dá)PTD-SARA融合蛋白，其既可高效進(jìn)入細(xì)胞又可阻斷smad2、smad3與smad4結(jié)合，阻斷TGF-β1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，進(jìn)而有效緩解腎臟纖維化進(jìn)程。
　　方法：使用大腸桿菌偏愛密碼子合成PTD-SARA全長基因，將其克隆入載體pQE-30中，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌M15感受態(tài)，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，經(jīng)Ni2+-NTA親和層析純化