sTRAIL-TMTP1融合蛋白的表達純化及生物學效應研究.pdf

1、第一部分
　　 【目的】利用原核表達系統(tǒng)表達純化sTRAIL-TMTP1融合蛋白，純化到足夠量后體外作用腫瘤細胞株，研究其對細胞凋亡的影響，體內(nèi)治療前列腺癌皮下瘤模型及胃癌原位模型，觀察其生物學效應。
　　 【方法】應用PET原核表達系統(tǒng)表達純化sTRAIL-TMTP1融合蛋白；應用Western Blot及考馬斯亮藍染色檢測融合蛋白的表達；運用流式細胞儀檢測融合蛋白對腫瘤細胞株凋亡的影響；建立前列腺癌細胞株P(guān)C-3M-

2、1E8皮下瘤模型，瘤旁注射融合蛋白治療；建立胃癌MKN-45sci原位模型，腹腔內(nèi)注射融合蛋白治療；量子點、免疫組織化學檢測融合蛋白的藥物代謝和腫瘤組織及其他器官細胞凋亡情況。
　　 【結(jié)果】用考馬斯亮藍染色結(jié)果：經(jīng)過純化后融合蛋白可濃縮至1mg/ml濃度；Western Blot在22KD附近可以被TRAIL抗體識別的條帶；在配對細胞株MDA-MB-231、MCF-7、PC-3M-1E8、PC-3M-2B4加入融合蛋白后48小

3、時，光鏡下出現(xiàn)明顯差異，Anexin-V、PI雙標流式細胞儀檢測凋亡，在高低轉(zhuǎn)移細胞株間存在統(tǒng)計學差異，在融合蛋白與對照組PBS中也存在顯著性差異；免疫組織化學檢測體內(nèi)藥物代謝，早期0.5-2h會出現(xiàn)腎臟一過性高表達，而后腫瘤組織中融合蛋白表達逐漸升高，至24h達到高峰，而心、肺等器官陰性表達；前列腺癌細胞PC-3M-1E8皮下瘤模型中，經(jīng)過治療后融合蛋白sTRAIL-TMTP1明顯效果好于對照組，治療一個周期（四周）后腫瘤直徑存在顯著

4、性差異；胃癌細胞MKN-45sci腫瘤原位模型治療后治療組和對照組之間原位腫瘤的體積、轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量均存在顯著性差異；體內(nèi)實驗中生存期組間也存在統(tǒng)計學差異。
　　 【結(jié)論】能通過原核表達系統(tǒng)來表達純化融合蛋白sTRAIL-TMTP1，且融合蛋白對高轉(zhuǎn)移性腫瘤細胞具有明顯的促凋亡作用，且其在體內(nèi)仍有明顯靶向腫瘤作用，體內(nèi)可抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移，延長實驗動物生存期。
　　 第二部分
　　 誘導腫瘤細胞凋亡是多數(shù)腫瘤治療中

5、的基礎(chǔ)，對腫瘤壞死因子(TNF)超家族的死亡受體已基本研究清楚，比如受體激活是的信號產(chǎn)生。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體（TRAIL）受體（受體TRAILR1和TRAILR2）有希望成為腫瘤治療的靶標。再次我們回顧一下近年來針對TRAIL受體進行腫瘤治療的進展。
　　 第三部分
　　 目的：觀察生長分化因子5（GDF-5）對體外培養(yǎng)的大鼠肌腱細胞及腱鞘滑膜細胞增殖的影響。為進一步研究在體內(nèi)局部添加GDF-5以促進損傷肌腱愈

6、合及改善外源性愈合所致粘連打下基礎(chǔ)。
　　 方法：MTT法測定不同濃度的GDF-5在體外對肌腱及腱鞘滑膜細胞增殖率的影響；流式細胞儀測定不同濃度的GDF-5在體外對肌腱及腱鞘滑膜細胞的凋亡率的影響。
　　 結(jié)果：GDF-5可以明顯促進肌腱細胞的增殖，而對腱鞘滑膜細胞的增殖率的作用較弱。但對兩種細胞的凋亡無明顯影響。
　　 結(jié)論：添加一定濃度的GDF-5后肌腱細胞增殖率較腱鞘滑膜細胞提高更為明顯，而凋亡并未發(fā)生改變