TrxA-EstB1融合蛋白的表達、純化與活性分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該文旨在將解毒酶酯酶B1基因融合高效表達,為其實際應(yīng)用創(chuàng)造條件.該文將從抗性庫蚊(Culex pipiens)中分離出的解毒酶基因和硫氧還蛋白融合表達載體pThioHisA用限制性內(nèi)切酶EcoRI消化,用低熔點膠回收消化片段并純化,純化后的載體脫磷,在T<,4>DNA連接酶作用下將二者進行體外連接,將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,在100μg/L氨芐青霉素平板上篩選Amp<'r>轉(zhuǎn)化子,將重組質(zhì)粒分別經(jīng)BgιⅡ、BamHI單酶切,電泳分

2、析獲得酯酶基因插入方向正確的融合表達質(zhì)粒,命名為pThioHisA-B1.以α-NA為底物對所構(gòu)建工程菌進行酯酶活性測定,結(jié)果表明該工程菌能高效降解α-NA,具有較強的酯酶活性,融合伴侶硫氧還蛋白促進了酯酶B1的正確折疊,形成了天然的蛋白質(zhì)構(gòu)象.該研究將工程菌以2.5﹪海藻酸鈉、3﹪CaCl<,2>進行包埋固定,以α-NA為底物測定固定化工程菌的酯酶活性,結(jié)果表明工程菌固定化后,酶活雖有所降低,但仍有一定的解毒能力.將最適條件下誘導的工

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