歐美楊108號(hào)遺傳轉(zhuǎn)化條件篩選及抗蟲(chóng)性測(cè)定.pdf

1、楊樹(shù)種類多、生長(zhǎng)快、適應(yīng)性強(qiáng)，在我國(guó)分布廣泛并大面積種植，在林業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)恢復(fù)中發(fā)揮著巨大的經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)功能。由于人工林面積的逐年增加和經(jīng)營(yíng)管理不當(dāng)，長(zhǎng)期遭受病蟲(chóng)的侵害，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)損失。本文以歐美楊108號(hào)(Populusnigra×Populus deltoids“108”)為受體材料，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，在優(yōu)化的轉(zhuǎn)化條件下將外源抗蟲(chóng)基因（Bt+蜘蛛殺蟲(chóng)肽基因）成功導(dǎo)入該受體中，并對(duì)轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行分子和生物測(cè)定，確定歐美楊10

2、8號(hào)轉(zhuǎn)化植株的表達(dá)效果、抗性水平，為抗蟲(chóng)楊樹(shù)的定向培育和野外應(yīng)用奠定科學(xué)基礎(chǔ)。
　　1.對(duì)歐美楊108號(hào)遺傳轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化后，確定最佳轉(zhuǎn)化體系為選擇歐美楊108號(hào)無(wú)菌苗葉基部置于不含卡那霉素、含200μmol/L AS的分化培養(yǎng)基中，預(yù)培養(yǎng)48h后用濃度OD600=0.1的菌液侵染10min，移入不含卡那霉素、含200μmol/L AS的分化培養(yǎng)基中，28℃共培養(yǎng)24h～48h后，取出置于溫室中除菌篩選培養(yǎng)，最終獲得抗性植株。

3、>　　2.以上述最佳轉(zhuǎn)化條件為基礎(chǔ)，進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，獲得卡那霉素抗性芽5株。經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè)4株呈陽(yáng)性，初步表明其目的基因已轉(zhuǎn)化到歐美楊108號(hào)基因組中。經(jīng)過(guò)PCR-Southern印跡雜交檢測(cè)，4株均呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率100％，進(jìn)一步證明，目的基因已整合到歐美楊108號(hào)基因組內(nèi)。
　　3.利用轉(zhuǎn)化植株對(duì)舞毒蛾幼蟲(chóng)進(jìn)行了生物測(cè)定，結(jié)果表明，2個(gè)轉(zhuǎn)化植株均具有延緩幼蟲(chóng)發(fā)育和降低發(fā)育速率的作用，而且轉(zhuǎn)化植株TP1對(duì)幼蟲(chóng)發(fā)育速率的影響明顯大于