臍血漿活性成分分析及其對臍血CD34+細胞增殖的影響.pdf

1、研究背景與目的：
　　 目前已經有大量實驗證實臍帶血造血干細胞比骨髓中和外周血來源的動員的造血干細胞更具有自我更新、增殖分化和體外擴增潛能,廣泛應用于干細胞移植以及其它臨床治療中。CD34+是造血干細胞的重要標志物,是最常用的分離造血干細胞的標志。CD34+造血干細胞在骨髓和臍帶血中含量相對較高,具有較強的自我更新和分化能力。而臍血漿是臍血干細胞增殖的天然微環(huán)境,其中的活性成分已經引起廣泛的關注,文獻已有報道,臍血漿能顯著促進血

2、細胞克隆形成和細胞增殖,也發(fā)現(xiàn)其血漿中含有干細胞因子(SCF)和粒細胞集落刺激因子(GM—CSF),但對臍血漿中活性蛋白成分的了解仍不全面。
　　 生物芯片是20世紀90年代初發(fā)展起來的一種全新的微量分析技術,目前常見分類主要是三大類:基因芯片、蛋白芯片、芯片實驗室。蛋白芯片集高通量、高速度、高質量和自動化等特點于一身,這是目前使用的其他檢測方法望塵莫及的[1]。
　　 為對臍血漿中的活性蛋白成分有較全面的了解,本研究利

3、用蛋白芯片技術,分析臍血漿中的活性成分,并觀察其對CD34+造血干細胞的增殖分化的影響,為相關細胞生物學臨床應用打下基礎。
　　 方法：
　　 本研究將采用蛋白芯片技術對臍血漿和健康青年女性靜脈血漿活性成分進行對比分析,用Gene Pix Pro4.0軟件進行人臍血漿和靜脈血漿兩個樣本的蛋白含量差異性分析。用MiniMACS免疫磁珠從臍血中分選出CD34+細胞,在CD34+細胞培養(yǎng)液中中加入臍血漿,顯微鏡下觀察并計數(shù)CD

4、34+細胞增殖能力。統(tǒng)計學分析:采用SPSS10.0軟件進行分析,t檢驗,P<0.05為有顯著性差異。
　　 結果：
　　 1、臍血漿中有多種蛋白分子的含量顯著高于靜脈血漿,包括SCF、IL-20、IL-12、IL-3、FGF-4、BMP-2、BMP-7、IGF-1、IL-4、Frizzled-3、RAGE、CRIM-1、Neuritin、Neuropilin-2、Neurturin、SFRP-3、Tomoregulin