間充質(zhì)干細(xì)胞及其培養(yǎng)上清、融凍產(chǎn)物對臍血CD34+細(xì)胞擴(kuò)增及分化作用的研究.pdf

1、造血干/祖細(xì)胞移植己成為治療難治性血液病、免疫缺陷病、惡性腫瘤最有效措施之一，它包括骨髓移植(Bone marrow transplantation，BMT)、外周造血干細(xì)胞移植(Peripheral blood stem cell transplantation，PBSCT)、臍血造血干細(xì)胞移植(Umbilical cord blood transplantation，UCBT)。自1988年Gluckman等采用UCBT成功地治療了

2、1例患Fanconi貧血的5歲患兒以來，臍血移植已成為造血干細(xì)胞移植的主要方法之一，全世界已超過9000余例，其中90％以上為小兒病例。 相對骨髓及外周血造血干細(xì)胞(Hematopoietic stem cell，HSC)而言，臍血來源豐富，采集方便，攜帶巨細(xì)胞病毒和EB病毒機(jī)率低，人類白細(xì)胞抗原(humam leucocyte antigen，HLA)配型要求較低，移植時(shí)容易找到供者，且移植后移植物抗宿主病(Graft-ver

3、sus-host disease，GVHD)發(fā)生率低、嚴(yán)重程度低等優(yōu)點(diǎn)，已被認(rèn)為是造血干細(xì)胞移植的新的干細(xì)胞來源。 UCBT。也有其自身的缺陷，因?yàn)橐浦参镏懈?祖細(xì)胞量，特別是每公斤體重有核細(xì)胞量，是受體能否重建造血及免疫的關(guān)鍵。此外移植物中免疫細(xì)胞的組成和功能也是決定移植后能否重建造血及平衡GVHD和移植物抗白血病(Graft verstlsleukemia， GVL)效應(yīng)的重要因素。臍血中有核細(xì)胞數(shù)量少，通常只及骨髓的1/1

4、0，單份臍血所含有的造血細(xì)胞量僅可以滿足體重40kg以下患者需求，對大部分成人患者來說，單份臍血有核細(xì)胞量不足，限制了其在成人患者中的應(yīng)用，且移植失敗后沒有機(jī)會(huì)再進(jìn)行同一供體造血干細(xì)胞移植補(bǔ)救和供者淋巴細(xì)胞輸注增強(qiáng)GVL效應(yīng)。臍血含有比骨髓細(xì)胞更原始、更早期的造血干細(xì)胞群，且臍血T淋巴細(xì)胞較原始，抗原表達(dá)弱，移植后的GVHD發(fā)生率及嚴(yán)重程度都比骨髓及外周血要低。但近十幾年的臨床經(jīng)驗(yàn)也證實(shí)，由于臍血有核細(xì)胞量少，干/祖細(xì)胞原始，高達(dá)10％

5、-20％的臍血移植未能植入，且UCBT后造血重建比骨髓移植明顯延遲，從而增加了移植失敗率、移植早期相關(guān)合并癥發(fā)生率、成份輸血頻率及時(shí)間、死亡率等。因此，如何促進(jìn)UCBT的植入及加速移植后的造血及免疫重建是急需解決的關(guān)鍵問題。近年來的主要研究進(jìn)展有：1、細(xì)胞因子誘導(dǎo)下體外擴(kuò)增臍血干細(xì)胞；2、雙份臍血移植；3、臍血和間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cell，MSC)聯(lián)合移植。 UCBT植入延遲原因之一為輸注的造血干/祖細(xì)胞，

6、特別是造血祖細(xì)胞過少所致，通過體外多種造血生長因子聯(lián)合培養(yǎng)，擴(kuò)增臍血造血祖細(xì)胞，將有望縮短造血重建的時(shí)問。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，采用MSCs為滋養(yǎng)層，聯(lián)合造血生長因子的擴(kuò)增體系，能顯著擴(kuò)增CD34+細(xì)胞的集落形成細(xì)胞(colony forming cells，CFCs)和長期培養(yǎng)起始細(xì)胞(long-term culture initiating cell，LTC-IC)，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行體內(nèi)移植能加速受體造血恢復(fù)，并在受體內(nèi)長期植入。進(jìn)一步的研

7、究證實(shí)，造血干細(xì)胞移植的失敗和造血恢復(fù)的延遲與放/化療預(yù)處理導(dǎo)致受體骨髓造血微環(huán)境的嚴(yán)重破壞密切相關(guān)。健全的骨髓造血微環(huán)境對HSC的植入及造血恢復(fù)有著極其重要的意義。MSC是骨髓造血微環(huán)境中的干細(xì)胞之一，具有高增殖、低免疫源性和多向分化的潛能。它可以通過釋放各種細(xì)胞因子，表達(dá)多種黏附分子、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，調(diào)節(jié)造血干細(xì)胞表面黏附分子表達(dá)，促進(jìn)其粘附、歸巢等，加速造血重建。 我們的基礎(chǔ)和臨床研究證實(shí)，MSC和臍血聯(lián)合移植，明顯加速受

8、體造血重建。近年的研究還證實(shí)，MSC不但可加速造血重建，可抑制T細(xì)胞的增殖，MSC的聯(lián)合移植可減少GVHD的發(fā)生。因此，MSC與臍血HSC共移植可能是解決臍血移植后造血、免疫重建延遲有效方法之一。既往MSC的聯(lián)合移植，我們均采用活細(xì)胞輸注的方法，由于MSC培養(yǎng)時(shí)機(jī)、細(xì)胞活性保存以及是否存在致瘤性的問題，給MSC臨床應(yīng)用帶來很大的不方便。此外，到目前為止，MSC加速造血恢復(fù)及抑制GVHD的具體機(jī)制如何，尚未明確。為此，尋求MSC的有效成份