人胎盤絨毛組織懸液支持臍血CD34+細(xì)胞體外擴(kuò)增的作用.pdf

1、研究目的：
　　 本研究旨在探討胎盤支持造血的功能，并通過研究不同時期的胎盤組織體外對臍血造血干細(xì)胞擴(kuò)增的作用，進(jìn)一步了解隨著胎齡的增長胎盤造血功能發(fā)生的變化。
　　 尋找出經(jīng)濟(jì)、適用性強(qiáng)的體外擴(kuò)增造血干細(xì)胞的方法，如果實(shí)驗(yàn)證明胎盤無細(xì)胞懸液的體外支持?jǐn)U增的能力，那么就可以變廢為寶，在節(jié)約大量昂貴的細(xì)胞因子的前提下，進(jìn)行有效的造血干細(xì)胞的擴(kuò)增，并能夠成功應(yīng)用于臨床。
　　 研究方法：
　　 1.采集妊娠早

2、期(6-8周)、中期（16-22周）、足月（滿37周）胎盤絨毛組織，無菌條件下生理鹽水反復(fù)沖洗絨毛組織并稱重，每組各3份，磨碎后高速離心取上清，置-80度分裝保存待用。
　　 2.應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液分選出單個核細(xì)胞，通過流式細(xì)胞儀分選CD34+細(xì)胞。
　　 3.應(yīng)用早期（B組）、中期（C組）和足月（D組）胎盤絨毛組織懸液，并設(shè)定空白對照（A組），以共培養(yǎng)的方式分4組進(jìn)行體外擴(kuò)增臍血造血干細(xì)胞并培養(yǎng)觀察擴(kuò)增后的集落形成能力

3、。
　　 4.統(tǒng)計學(xué)分析:應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對所得資料進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以(x)±s表示。應(yīng)用單因素方差分析對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.CD34+-FITC上機(jī)分選，選出抓取標(biāo)記細(xì)胞的范圍p5，抓取范圍內(nèi)的細(xì)胞占總數(shù)的18.6％，此區(qū)域內(nèi)(P5) CD34+細(xì)胞收集效率為95％，抓取獲得細(xì)胞為6×105個，細(xì)胞純度可達(dá)99％。
　　 2.共培養(yǎng)7天

4、后以接種初濃度為對比，A組空白對照組細(xì)胞呈逐漸衰減趨勢，B組擴(kuò)增效果不明顯，為1.40±0.20，C組和D組均能有效擴(kuò)增造血干細(xì)胞，擴(kuò)增倍數(shù)分別為2.93±0.50和4.80±0.40。
　　 3.各組培養(yǎng)7天后，流式細(xì)胞儀檢測各組CD34+細(xì)胞平均陽性率，實(shí)驗(yàn)前混勻各孔細(xì)胞，各孔取部分細(xì)胞做流式檢測，結(jié)果顯示中期、足月組在培養(yǎng)后造血干細(xì)胞的陽性率維持較高水平，遠(yuǎn)強(qiáng)于空白對照組和早期實(shí)驗(yàn)組，中期陽性率最高為53.4％。
　

5、　 4.集落培養(yǎng)14天后，結(jié)果顯示C、D組集落形成總數(shù)明顯高于A、B組，C組CFU-GM、CFU-GEMM、BFU-E集落數(shù)均略高于D組。
　　 結(jié)論：
　　 1.在沒有外源性細(xì)胞因子存在的情況下，不同時期的胎盤絨毛組織懸液均可以支持造血干細(xì)胞的體外擴(kuò)增，且隨著胎盤發(fā)育其支持造血的功能呈現(xiàn)不斷增強(qiáng)的趨勢。
　　 2.擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞的集落形成能力呈現(xiàn)先增強(qiáng)后減弱的現(xiàn)象，中期胎盤培養(yǎng)擴(kuò)增后的干細(xì)胞集落形成能力最