PF對TNF-a誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞增殖、STAT-3激活及MMP-2、VEGF分泌的影響.pdf

1、芍藥苷是毛銀科植物芍藥的根部提取物,藥理作用廣泛,主要有抗炎、調(diào)節(jié)免疫、護(hù)腎、護(hù)肝、抗抑郁及影響細(xì)胞增殖等作用,占白芍總苷的90％。臨床研究發(fā)現(xiàn)白芍總苷對銀屑病治療有確切的療效。
　　銀屑病是一種慢性炎癥性、增生性皮膚病,好發(fā)于中青年,病情頑固,反復(fù)發(fā)作并進(jìn)行性加重,對人體構(gòu)成了很大危害。其組織病理主要表現(xiàn)為角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocyte,KC)過度增殖和分化異常,炎癥細(xì)胞浸潤和真皮毛細(xì)血管增生,延長,遷曲和擴(kuò)張。STAT

2、-3參與細(xì)胞內(nèi)信號傳遞,在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用,調(diào)控眾多的細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的基因表達(dá),調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),參與銀屑病發(fā)病。因此,STAT-3是銀屑病治療的一個重要靶點(diǎn)。
　　本論文的主要目的是研究芍藥苷在體外對STAT-3激活及STAT-3激活后引起的細(xì)胞增殖,及下游細(xì)胞因子MMP-2,VEGF分泌增加的影響,以期從STAT-3的新角度闡明芍藥苷的作用機(jī)制,為芍藥苷在臨床上應(yīng)用于銀屑病及表皮增殖性皮膚病的治療提供基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依

3、據(jù)。
　　針對以上研究目的,設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、結(jié)果如下:
　?、賂NF-a誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞增殖,STAT-3激活及MMP-2、VEGF的分泌:用TNF-a10ng/ml誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞,倒置顯微鏡觀察HaCaT細(xì)胞的形態(tài)變化,刺激組細(xì)胞較正常對照組比,細(xì)胞數(shù)量明顯增多,細(xì)胞形態(tài)無明顯差別;MTT比色法檢測細(xì)胞增殖率發(fā)現(xiàn),TNF-a刺激后細(xì)胞顯著增殖,達(dá)201%。用western-blot檢測激活的STAT-3(p-STAT-3)

4、,發(fā)現(xiàn)經(jīng)未經(jīng)刺激無p-STAT-3表達(dá),TNF-a刺激后p-STAT-3表達(dá)明顯;熒光定量PCR檢測STAT-3mRNA及激活的STAT-3下游細(xì)胞因子MMP-2,VEGF的mRNA的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)刺激后STAT-3mRNA表達(dá)無明顯改變,MMP-2,VEGF表達(dá)明顯增強(qiáng)。
　?、谏炙庈諏NF-a誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞增殖、STAT-3激活及MMP-2、VEGF的分泌的影響:設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)組干預(yù)組為濃度梯度組和時(shí)間梯度組。倒置顯微鏡觀察

5、濃度組和時(shí)間組HaCaT細(xì)胞的形態(tài)的變化,各濃度和時(shí)間組細(xì)胞形態(tài)均正常,各濃度組間無明顯差別,與TNF-a刺激比,細(xì)胞密度稍稀疏,干預(yù)24h后最明顯;MTT比色法檢測芍藥苷干預(yù)對經(jīng)TNF-a刺激后的HaCaT細(xì)胞的增殖的抑制情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)芍藥苷對誘導(dǎo)后HaCaT細(xì)胞增殖抑制率呈時(shí)間和濃度依賴性;western-blot法檢測各濃度對激活的STAT-3(p-STAT-3)的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)各濃度對激活的STAT-3無明顯逆轉(zhuǎn)作用;熒光定量P