氮6-環(huán)戊基腺苷對大鼠腎缺血-再灌注損傷延遲性保護作用的實驗研究.pdf

1、目的:腎缺血-再灌注損傷(RIRI)是臨床工作中經(jīng)常遇到的問題,在一些腎臟手術如腎實質(zhì)切開取石、腎部分切除、腎蒂損傷修復等手術中,暫時阻斷腎臟血流是必要的。作為一名麻醉工作者臨床上也經(jīng)常會遇到急性腎缺血、急性腎功能衰竭等情況。如何減輕和防治腎缺血一再灌注損傷,一直是人們對腎臟損傷保護的主要研究課題。腎缺血一再灌注損傷的發(fā)主要機制為:氧自由基增多、細胞內(nèi)鈣超載和鈣震蕩、細胞內(nèi)PH和滲透壓的改變、內(nèi)皮細胞的激活、中性粒細胞介導的損傷、微血管

2、損傷、細胞因子和核因子-KB(NF-κB)等所引起的損傷以及腎臟組織細胞的凋亡。目前關于如何減輕或防治腎缺血-再灌注損傷的研究甚多,但其臨床實用價值均不大。為尋求更大的臨床實用價值,近年來關于如何啟動內(nèi)源性抗損傷機制成為研究的熱點,關于腺苷A1受體激動劑的研究就是其中的熱點之一。目前國內(nèi)關于腺苷A1受體在心臟、腦等器官缺血一再灌注損傷保護作用的研究已有大量報道,但目前國內(nèi)尚無關于腺苷A1受體激動劑在腎缺血-再灌注損傷中作用的報道。本實驗

3、通過建立大鼠腎缺血-再灌注損傷模型,探討氮6-環(huán)戊基腺苷(N6-Cyclopentyl adenosine,CPA)對大鼠腎缺血-再灌注損傷的保護作用,為尋找防治腎缺血-再灌注損傷有效的藥物提供實驗依據(jù)。
　　 方法:32只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,體重250-300g,隨機分為4組,每組8只,①假手術組(S組),②缺血-再灌注組(I/R組),③CPA預先給藥+缺血-再灌注組(C組),④CPA+8-環(huán)戊基-1

4、,3-二丙基黃嘌呤(8-Cyclopentyl-1,3-2-propyl xanthine,DPCPX)預先給藥+缺血-再灌注(CD組)。
　　 10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉,一側(cè)頸內(nèi)靜脈穿刺,0.9％生理鹽水8ml/kg·h持續(xù)泵入。采用夾閉雙側(cè)腎蒂45min,再灌注24h制備腎缺血-再灌注損傷模型。用無創(chuàng)動脈夾夾閉雙側(cè)腎蒂,腎臟顏色由紅變?yōu)樽霞t色即可確認腎血流被阻斷,造成腎缺血45min后,松開動脈夾,腎臟由紫紅色

5、恢復為紅色即可確認血流恢復。①假手術組(S組):僅行開腹,游離雙側(cè)腎臟,分離雙側(cè)腎蒂但不夾閉,傷口用生理鹽水紗布覆蓋,暴露45min不做腎缺血處理；②缺血一再灌注組(I/R):暴露腎臟后夾閉雙側(cè)腎蒂,缺血45min后開放動脈夾,再灌注24h；③CPA+缺血45min再灌注24h組(C組):CPA1.0 mg&g在夾閉腎蒂前15 min腹腔內(nèi)注射,余操作同I/R.組④:CPA+DPCPX預先給藥+缺血45min再灌注24h組(CD組)；C

6、PA1.0 mg&g DPCPX1.0 mg/kg在夾閉腎蒂前15 min腹腔內(nèi)注射,余操作同I/R組。
　　 所有動物均于再灌注24h時處死。酶法測定血清肌酐(creatinine,Cr)水平、苦味酸不除外蛋白法測定血清尿素氮(usea nitrogen,BUN)水平；比色法測定腎組織丙二醛(malondidehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、髓過氧化物酶(myel

7、operoxidase,MPO)含量；腎組織制備腎臟單細胞懸液,經(jīng)碘化丙啶(propidine iodide,PI)染色后用流式細胞分析法測定腎臟細胞凋亡率。蘇木素一伊紅(hematoxvlin-eosin,HE)染色觀察腎組織病理學變化。
　　 結(jié)果:
　　 1血清Cr和BUN濃度變化
　　 與S組比較,再灌注24h時,I/R組、C組、CD組血清Cr和BUN濃度明顯升高(P<0.05)。與I/R,CD組比較,C

8、組Cr和BUN濃度明顯降低(P<0.05)；
　　 I/R組和CD組之間比較差別不大(P>0.05)。
　　 2腎組織的SOD活性和MDA含量MPO含量的變化
　　 與S組相比,I/R組、C組、CD組腎組織SOD活性均降低,MDA,MPO含量均升高(P<0.05)；
　　 與I/R,CD組比較,C組SOD活性升高,MDA,MPO含量均減少(P<0.05)。
　　 UR組和CD組之間比較差別不大(P

9、>0.05)。
　　 3光鏡下觀察腎組織的病理改變
　　 S組腎小球、腎小管未發(fā)現(xiàn)明顯的形態(tài)學改變。
　　 FR組腎小球細胞數(shù)量減少,部分腎小球局部有壞死,球叢毛細血管擴張充血,內(nèi)有炎細胞浸潤,腎小管上皮細胞嚴重水腫、壞死、脫落,管腔狹窄,部分腎小管腔內(nèi)可見蛋白管型。間質(zhì)內(nèi)血管擴張充血,有炎細胞浸潤。
　　 C組球從毛細血管擴展充血比I/R組減輕,少量炎細胞浸潤,腎小管上皮水腫減輕部分腎小管腔內(nèi)可見少量蛋

10、白管型。
　　 CD組與I/R組相比無明顯變化。
　　 4腎組織細胞凋亡率的變化
　　 與S組相比,I/R組、C組和CD組腎組織細胞凋亡率明顯升高(P<0.05)。
　　 與I/R組相比C組腎組織細胞凋亡率明顯降低(P<0.05)。
　　 與CD組比較C組腎組織細胞凋亡率明顯降低(P<0.05)。
　　 I/R組與CD組比較差別不大(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
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