胰高血糖素樣肽—2對28日齡斷奶仔豬腸上皮細(xì)胞完整性及其增殖的影響.pdf

1、本試驗以原代培養(yǎng)的28日齡斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞為研究模型，研究胰高血糖素樣肽-2（GLP-2）對斷奶仔豬腸上皮細(xì)胞增殖及其功能的影響。研究共包括兩個試驗：試驗一、28日齡斷奶仔豬腸道上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)及生長規(guī)律；試驗二、胰高血糖素樣肽-2對28日齡斷奶仔豬腸道上皮細(xì)胞增殖和功能的影響。 試驗一共設(shè)6個處理（1-1、1-2、1-3、1-4、1-5、1-6），每個處理設(shè)8個重復(fù)，每個重復(fù)1孔，在37℃，5％ CO2條件下培養(yǎng)144小

2、時，在培養(yǎng)的第48h、72h、96h、120h、144h和168h分別測定細(xì)胞的MTT OD值，同時用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)，并攝影記錄。結(jié)果表明：28日齡斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞體外接種48h貼壁生長，在細(xì)胞接種的48h至72h，細(xì)胞大量增殖，在72h至96h，細(xì)胞增殖減緩，到96h時達(dá)到最大值，在接種120-168h，細(xì)胞增殖減少和凋亡增加，細(xì)胞數(shù)量逐漸減少。 試驗結(jié)果表明：要確定某一物質(zhì)對斷奶仔豬IEC的作用和其它定量測

3、試最佳時間應(yīng)該在細(xì)胞接種的48-96h。 試驗二共設(shè)6個處理（2-1、2-2、2-3、2-4、2-5、2-6），每個處理設(shè)16個重復(fù)，每個重復(fù)1孔，在37℃，5％ CO2條件下培養(yǎng)48h后分別換為含GLP-2濃度為0、10-11、10-10、10-9、10-8和10-7mol/l的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48h，收集培養(yǎng)液上清和細(xì)胞裂解液進(jìn)行指標(biāo)測定，并分別在接種后48、72、和95h利用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長情況。結(jié)果如下：在

4、細(xì)胞培養(yǎng)液中加入GLP-2處理48h，各處理組細(xì)胞數(shù)量顯著（P<0．05）或極顯著（P<0．01）多于對照組，MTT OD值均極顯著高于對照組（P<0．01）。各處理組培養(yǎng)液乳酸含量、總蛋白含量、蛋白沉積量和Na+，K+-ATP酶活力都顯著（P<0．05）或極顯著（P<0．01）高于對照組。此外，各處理組胞外堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶和肌酸激酶活力均極顯著低于對照組（P<0．01）。 綜上試驗結(jié)果表明，GLP-2可以促進(jìn)斷奶仔豬小腸