吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析方法用于HIV-1p24抗原檢測(cè)的研究.pdf

1、自HIV病毒被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，艾滋病在全球范圍內(nèi)的傳播趨勢(shì)日益嚴(yán)重，為科研和預(yù)防工作提出了嚴(yán)峻的考驗(yàn)。HIV-1 p24抗原的高靈敏度檢測(cè)，在過(guò)去的十幾年里得到了不斷的改進(jìn)和提高，并作為縮短窗口期、提高檢測(cè)靈敏度的檢測(cè)體系引入到了第四代抗體檢測(cè)方法中去，為艾滋病的預(yù)防和檢驗(yàn)，病毒感染情況的監(jiān)測(cè)，艾滋病患者病情的控制及用藥的效果研究都起到了應(yīng)有的重要作用。 本課題將化學(xué)發(fā)光體系引入到p24抗原檢測(cè)方法中來(lái)，以吖啶酯作為發(fā)光試劑，以雙抗夾

2、心法為原理，建立HIV-1 p24抗原的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法。將檢測(cè)靈敏度提高到fg級(jí)的水平；具有反應(yīng)時(shí)間短，靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，費(fèi)用低廉，不影響抗原抗體生物學(xué)活性等優(yōu)點(diǎn)。對(duì)于HIV-1 p24抗原檢測(cè)方法的改進(jìn)有很好的理論和實(shí)際意義。 本課題將吖啶酯作為化學(xué)發(fā)光試劑對(duì)抗p24抗體進(jìn)行直接標(biāo)記，標(biāo)記比率為1.46。標(biāo)記吖啶酯的抗體作為檢測(cè)抗體同包被抗體一起組成了雙抗夾心抗原檢測(cè)體系，建立了基于吖啶酯標(biāo)記抗體的p24抗原化學(xué)發(fā)光免

3、疫分析方法。 為了進(jìn)一步優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，本課題設(shè)計(jì)了一系列正交實(shí)驗(yàn)，對(duì)封閉蛋白及Tween-20去污劑的應(yīng)用進(jìn)行了深入的研究。其中，以牛血清白蛋白同酪蛋白進(jìn)行比較，前者的封閉效果更為理想；在分析緩沖液中加入封閉蛋白將有利于減少非特異性信號(hào)；分析緩沖液中加入Tween-20，但在第三次洗滌的緩沖液中不加入Tween-20有利于較高信噪比。 此后，我們從方法學(xué)的角度對(duì)該方法進(jìn)行了分析靈敏度、功能靈敏度、檢測(cè)寬度等多方面的評(píng)價(jià)，并同

4、常用的酶聯(lián)免疫分析方法進(jìn)行了比較。HIV-1 p24抗原吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的功能靈敏度為0.5pg/ml，比普通的ELISA方法低1-2個(gè)數(shù)量級(jí)；分析靈敏度為0.5pg/ml；線性范圍在0.5 pg/ml-100ng/ml，比普通的ELISA方法高1-2個(gè)數(shù)量級(jí)；HIV-1 p24抗原吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析方法與普通的ELISA檢測(cè)方法具有很好的相關(guān)性，在P≤0.01情況下，相關(guān)系數(shù)為0.951。 同時(shí)，以HIV-1 p