PARP-1、Mitofilin和Caspase3在擬老化大鼠聽皮層及耳蝸中表達的研究.pdf

1、目的：觀察PARP-1、Mitofilin和Caspase3在D-半乳糖誘導的擬老化大鼠聽皮層及耳蝸中的表達.
　　方法：將132只聽閾小于40db，無中耳疾患的7周齡Spragua-Dawley大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機分為2組：①D-半乳糖組（66只）：每日在頸背部皮下注射500mg/kgD-gal，共8周。②生理鹽水組（66只）：在同一部位按等體積注射生理鹽水。聽性腦干反應(yīng)（ABR）檢測D-gal組和陰性對照組SD大鼠4月齡、

2、10月齡、16月齡的聽閾。實時定量PCR檢測耳蝸和聽皮層組織各組各個時間點PARP-1、Mitofilin和Caspase3mRNA的基因表達水平。Western Blot檢測PARP-1、Mitofilin及Caspase3的蛋白表達變化。免疫組織化學和免疫熒光行PARP-1、Mitofilin及Caspase3的定位檢測。甲苯胺藍染色觀察聽皮層中神經(jīng)元的形態(tài)學變化。
　　結(jié)果：①ABR檢測發(fā)現(xiàn)隨著年齡的增長聽閾逐漸提高，以高頻

3、為主。②免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)Mitofilin和Caspase3在聽皮層及耳蝸中廣泛表達；PARP-1在聽皮層中廣泛表達，在耳蝸中主要表達在螺旋神經(jīng)節(jié)。③聽皮層和耳蝸中PARP-1的mRNA表達隨年齡的增長呈增多的趨勢，但在10月齡后表達趨于穩(wěn)定，僅在4月齡時D-gal組高于NS組；PARP-1蛋白（89KD和113KD）表達隨年齡的增長而增多，同一時間點D-gal組均高于NS組。④聽皮層和耳蝸中Mitofilin的mRNA表達和蛋白水平觀

4、察發(fā)現(xiàn)NS組隨年齡的增長呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，在10月齡時達到峰值，D-gal組隨年齡逐漸降低，在4月齡時D-gal組高于NS組，而在10月齡和16月齡時D-gal組低于NS組。⑤聽皮層和耳蝸中Caspase3的mRNA水平隨著年齡的增加而增高，僅在4月齡時D-gal組高于NS組；Caspase3的蛋白表達隨著年齡的增加而降低，在4月齡和10月齡時D-gal組高于NS組，在16月齡時D-gal組低于NS組。⑥隨著SD大鼠年齡的增長，在