Drp1在擬老化大鼠模型蝸核中的表達(dá)研究.pdf

1、【目的】探討線粒體分裂蛋白Drp1和轉(zhuǎn)錄后修飾蛋白SUMO2/3在D-半乳糖誘導(dǎo)的擬老化大鼠模型蝸核中的表達(dá)功能
　　【方法】選取聽功能正常的7周齡健康SD大鼠160只，雌雄不拘，隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。D-半乳糖實(shí)驗(yàn)組：每日頸背部皮下注射D-半乳糖（500mg/Kg）一次，連續(xù)8周；NS對(duì)照組：每日頸背部皮下注射0.9％生理鹽水（10ml/Kg）一次，連續(xù)8周。分別于給藥結(jié)束后0個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，留取蝸神

2、經(jīng)核組織。通過(guò)Western blot檢測(cè)Drp1、SUMO2/3和細(xì)胞色素C在蝸核中的蛋白表達(dá)含量；Rt-PCR檢測(cè)Drp1和SUMO2/3的基因表達(dá)情況；透射電子顯微鏡觀察蝸核神經(jīng)元線粒體超微結(jié)構(gòu)變化；免疫組織化學(xué)定位和半定量細(xì)胞色素 C表達(dá)情況；動(dòng)物處死前聽性腦干反應(yīng)（ABR）檢測(cè)聽閾。
　　【結(jié)果】①Western blot結(jié)果顯示：隨著年齡增長(zhǎng)，蝸核內(nèi)Drp1和細(xì)胞色素C蛋白含量也在增加；Drp1和細(xì)胞色素C的蛋白含量在

3、各時(shí)間點(diǎn)相比，D-半乳糖組明顯高于NS對(duì)照組。而SUMO2/3蛋白含量隨著年齡增長(zhǎng)則明顯下降，各時(shí)間點(diǎn)相比，D-半乳糖組也明顯低于NS對(duì)照組。②RT-PCR結(jié)果顯示：蝸核組織內(nèi)Drp1的mRNA含量隨著年齡增長(zhǎng)和各時(shí)間點(diǎn)的對(duì)比都與蛋白質(zhì)含量表達(dá)相一致；而隨著年齡增長(zhǎng)
　　SUMO2/3的mRNA含量在D-半乳糖組明顯增加，NS對(duì)照組則無(wú)明顯變化，各時(shí)間點(diǎn)SUMO2/3的mRNA含量則是D-半乳糖組明顯高于NS對(duì)照組。③ABR聽性腦

4、干測(cè)聽的聽力結(jié)果顯示：打藥后12月齡和0月齡的大鼠相比，D-半乳糖組和NS對(duì)照組聽閾都有所升高，而各時(shí)間點(diǎn)相比,D-半乳糖組和NS對(duì)照組聽閾則無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。④透射電子顯微鏡結(jié)果顯示：各時(shí)間點(diǎn)，D-半乳糖組和NS對(duì)照組相比，線粒體形態(tài)有所改變，數(shù)目增多，體積減小，腫脹，空泡化可見，隨著年齡的增長(zhǎng)細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)脂褐素等。⑤免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：細(xì)胞色素C主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，隨著年齡的增加，細(xì)胞色素C表達(dá)陽(yáng)性神經(jīng)元增多，而在D-半乳糖實(shí)驗(yàn)組與