哺乳細胞暴露于化學(xué)致癌劑MNNG應(yīng)答基因鑒定.pdf

1、本研究利用基因芯片技術(shù)，研究人羊膜上皮FL細胞暴露于烷化劑MNNG后細胞基因組表達的改變，用來探索化學(xué)致癌物誘發(fā)哺乳動物細胞應(yīng)答反應(yīng)的分子機制，并為尋找人群接觸環(huán)境致癌物MNNG后的早期生物標(biāo)志物提供線索。研究內(nèi)容包括兩部分：其一為FL細胞暴露于不同濃度MNNG后基因表達譜的劑量-效應(yīng)關(guān)系研究，其二為暴露于MNNG后不同時間點基因表達譜的時間-效應(yīng)關(guān)系研究?！　⊥ㄟ^實驗發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)L細胞分別暴露于0.2μM、1.0μM、10.0μMMNN

2、G后，相對于對照組DMSO處理，三個處理濃度分別有70，112，146個，共281個基因表達發(fā)生改變。FL細胞暴露于1.0μMMMNNG后，在暴露后3小時、12小時及24小時，相對于對照組DMSO處理，分別有1425、643、675個，共2408個基因表達發(fā)生改變，3個時間表達改變2倍以上的基因分別為200、151、145個基因，共422個基因。對用芯片篩選到的應(yīng)答基因，按照其參與生物過程，主要包括：轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)基因，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因，

3、細胞周期調(diào)控相關(guān)基因，細胞骨架相關(guān)基因，蛋白質(zhì)合成相關(guān)基因，免疫反應(yīng)相關(guān)基因，代謝相關(guān)基因以及其他功能已知和未知基因。 本實驗應(yīng)用高通量的實時熒光定量PCR技術(shù)，4采用ABI公司的低密度表達譜芯片，對FL細胞暴露于MNNG后的劑量-效應(yīng)關(guān)系和時間-效應(yīng)關(guān)系篩選的應(yīng)答基因進行驗證。目前，在劑量-效應(yīng)關(guān)系和時間-效應(yīng)關(guān)系研究中，已分別有12個和11個基因表達改變得到驗證。在已被驗證的23個基因中，有5個上調(diào)，18個基因下調(diào)，其中包括

4、與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相關(guān)基因，如ID1、ZNF302、NFAT5、EGR1和CEBPG，與細胞周期調(diào)控相關(guān)基因，如CCNE2、CYR61、1IL8、IGF1R等，還包括與蛋白質(zhì)合成相關(guān)基因，如COG5、RANBP2TRA1等基因，還有其他如參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫反應(yīng)等基因。 由此可見，用高通量的基因芯片技術(shù)結(jié)合Real-timePCR技術(shù)能夠有效研究哺乳動物細胞暴露于MNNG的應(yīng)答反應(yīng)基因的全貌。細胞在烷化劑MNNG暴露后發(fā)生了廣泛而復(fù)雜的反