Prokineticin2（PK2）對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞遷移及向神經(jīng)元定向分化作用的研究.pdf

1、佳木斯大學(xué)碩士學(xué)位論文Prokineticin2（PK2）對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞遷移及向神經(jīng)元定向分化作用的研究姓名：李欣申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：朱曉峰;張曉梅20080410O b j e c t i v e ：T o i n v e s t i g a t e e f f e c t o f P r o k i n e t i c i n 2 o n n e u r a l s t e m c e l l m i g r a

2、 t i o n a n dd i f f e r e n t i a t i o n i nv i t r oa n d b 凼o f M C A o r a t ．M e t h o d s ：T h ea d v a n t a g e o f S e I ' U l ／I f r e e a n d c l o n e c u l t u r i n g t e c h n o l o g y i s p e r f o

3、 r m e dt oi s o l a t e , c u l m _ r ea n d p a s s e g e n e u l ' a ls t e mc e i l sf r o mn e o n a t a lr a t , i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y u s e df o ri d e n t i f i c a t i o n o f n e s t i n p

4、 i g m e n t a t i o n ．N e u r a ls t e r nc e l l sb e p l a c e d i nt h e P K 2 s c a t t e r e d a r o u n dt h e S O I I W ：eo f p r o l i f e r a t i o n , P K 2 p r o l i f e r a t i o n s o u r c e b e m a d e o

5、 f 5 ％a g a r a n d P K 2 ．A c c o r d i n g t ot h e d i f f e r e n t d o s e so fP K ．2 ，g r o u p s a r ea s f o l l o w s ：l m o l P K 2 、3 0 n m o lP K 2 、6 0 n m o lP K 2 ，c o n t r o l g r o u pw i t h o u tP K 2

6、 ．T r a i n i n gi nb a s i c c u l t u r em e d i u m ，b a s i c c u l t u r em e d i u mc o n t a i n i n gO ．3 ％a g a rt h eD M E M ／F 1 2 ( w i t h d r a w a lb F G F ) ．C u l t u r e di n t h eD M E M ／F 1 2c e l lc

7、 u l t u r em e d i u m , c u l t u r em e d i u m c o n t a i n i n g3 ％a g a r a n d r e m o v e d b F G F ．C o n t i n u o u so b s e r v en e t w a ls t e m c e l l si n14 d ．S c r e e n i n go f a n e u r a ls t e m

8、c e l lm i g r a t i o n i n d u c e d b y t h eb e s t r o l eP K 2d o s e ．T h r e a d o f t h eW i s t a rr a t si n t om i d d l ec e r e b r a la r t e r yo c c l u s i o n ( M C A O ) m o d e l ．M C A Om o d e l r

9、a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o 3 g r o u p s ：m o d e l g r o u p ，c o n t r o l g r o u p ( s i m p l yt r a n s p l a n t e dN S C s ) ，P K 2g r o u p ( P K 2 a n d N S C s c o n l l T l O n t r a

10、n s p l a n t ) ，2 4 ／g r o u p ．U s i n g t h r e e -d i m e n s i o n a l p o s i t i o n i n g ，a f t e rB r d U l a b e l i n go f t h e N S C s t r a n s p l a n t e di n t or a tM C A O m o d e l t ot h er i g h t

11、l a t e r a lv e n t r i c l e ，t h eb e s td o s eP K 2 塒e e t e d i nt h e r i g h tl e s i o n a r e ao fM C A O m o d e lr a t s ．E a c hg r o u p ，r e s p e c t i v e l y 1 , 3 ，7 ，1 4 d a f t e rt r a n s p l a n t

12、 a t i o n , t h e r a t sw e r e s a c r i f i c e da n d t h e i rb r a i n 丘X e d ．T o t h eo p t i cc h i a s ma st h ec e n t e r , s l i c e d ．U s i n gi m m u n o h i s t o c h e m i s t r y m e t h o d t od e t

13、e c tB r d U - p o s i t i v ec e l l m i g r a t i o nt o t h e l e s i o n s ．U s i n g i m m u n o f l u o r e s c e n c e m e t h o dt oo b s e r v e d t h a t n e u r a ls t e m c e l l so f m o v e d t ot h el e s

14、i o n s d i f f e r e n t i a t e i n t on e u r o n s ．R e s u l t s ：①I(mǎi) nv i t r os t u d i e ss h o w e d , c o m p a r e d 誦Ⅱ1t h ec o n t r o lg r o u p ，t h ed i f f e r e n td o s e so fP r o k i n e t i c i n 2h

15、a v e i n d u c e dm i g r a t i o no f n e u r a ls t e mc e l l s ，a n d 1 n m o lP r o k i n e t i c i n 2i n d u c e dm i g r a t i o n o ft h e m o s t o b v i o u s r o l e ，t h e r e a r e s t a t i s t i c a l l

16、y s i g n i f i c a n td i f f e r e n c e s ( P < O ．0 1 ) ．匡) T r a n s p l a n t a t i o no f n e u r a ls t e mc e l l s i n ld , c o m p a r e dw i t hm o d e lg r o u pi ns v z , t h eB r d U -p o s i t i v en e

17、 u r a ls t e mc e l l sh a v em a r k e d l yi n c r e a s e di ns i m p l en e u r a ls t e mc e l lW a n s p l a n t a t i o ng r o u pa n d P K 2 g r o u p s ，t h e r ea r es t a t i s t i c a l l yd i 付％r e n c e sQ