微小病毒B19感染與Kikuchi病的相關(guān)性及其發(fā)病機(jī)理的初步研究.pdf

1、Kikuchi病(Kikuchi-FujimotoDisease，KFD)又稱(chēng)為組織細(xì)胞性壞死性淋巴結(jié)炎(histiocyticnecrotizinglymphadenitis)，由日本學(xué)者Kikuchi和Fujimoto于1972年首先報(bào)道。是一種主要累及淋巴結(jié)的自限性全身性疾病。世界各地均有發(fā)病，但以東方青年女性多見(jiàn)。其病理特征主要為淋巴結(jié)散在灶片狀壞死，伴有大量組織細(xì)胞浸潤(rùn)。到目前為止，KFD的病因仍不清楚。 在KFD的病

2、因?qū)W研究中，有幾篇報(bào)道涉及到B19病毒，但仔細(xì)分析這些文章就會(huì)發(fā)現(xiàn)，其中所述的KFD都伴發(fā)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡或者嗜血細(xì)胞綜合癥，并不是獨(dú)立的疾病。而對(duì)于獨(dú)立的原發(fā)性KFD(idiopathicKFD，iKFD)，僅有1篇文獻(xiàn)研究了二者的相關(guān)性但得到了陰性結(jié)果。 在此，本實(shí)驗(yàn)首先按照KFD的診斷標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)HE、CD68免疫組化染色、結(jié)合臨床資料并排除木村病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、結(jié)核等其它可引起淋巴結(jié)碎屑樣壞死的疾病而篩選了3

3、3例iKFD患者進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。同時(shí)以16例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者作為對(duì)照。 然后，我們通過(guò)nPCR、ISH和IHC獨(dú)立地采用雙盲法檢測(cè)了33例iKFD和16例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者淋巴結(jié)活檢組織中微小病毒B19的核酸和蛋白。結(jié)果表明，通過(guò)這三種方法分別在87.1％、69.7％和57.6％的iKFD患者淋巴結(jié)組織中檢測(cè)出B19病毒核酸或蛋白。而在反應(yīng)性增生淋巴結(jié)中，其陽(yáng)性率分別為56.3％、31.3％和25.0％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，二組間感染

4、率差別顯著(PCR中，P=0.029；ISH中，P=0.011；IHC中，P=0.032，前者經(jīng)Fisher精確檢驗(yàn)，后二者經(jīng)x2檢驗(yàn))。 接著采用免疫組化-原位雜交雙標(biāo)記的方法分析在iKFD中B19病毒感染的細(xì)胞類(lèi)型。發(fā)現(xiàn)CD20+B淋巴細(xì)胞、CD68+組織細(xì)胞及CD4+T淋巴細(xì)胞均有少數(shù)細(xì)胞感染B19病毒，而CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞則大量被感染。 最后我們?cè)趐EGFP-C2質(zhì)粒的基礎(chǔ)上構(gòu)建了B19病毒主要致病蛋白N

5、S1的真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-NS1，為繼續(xù)探討B(tài)19病毒對(duì)靶細(xì)胞的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。 綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)微小病毒B19基因組DNA和病毒衣殼蛋白在iKFD病變淋巴結(jié)中有著顯著的高陽(yáng)性率，揭示iKFD可能與微小病毒B19感染有關(guān)，為KFD的病因?qū)W研究提供了新線(xiàn)索；發(fā)現(xiàn)了在iKFD中微小病毒B19感染的細(xì)胞類(lèi)型以CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞細(xì)胞為主，少部分CD4+輔助T細(xì)胞、CD20+B淋巴細(xì)胞、CD68+組織細(xì)胞亦被B19病毒