硫化砷對(duì)NHL細(xì)胞株作用機(jī)制的研究及復(fù)發(fā)難治性NHL的治療觀察.pdf

1、淋巴瘤是當(dāng)代社會(huì)十大惡性腫瘤之一，它起源于淋巴結(jié)和淋巴組織，按病理組織學(xué)改變可分為霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma，HL)和非霍奇金淋巴瘤(non Hodgkdn's lymphoma, NHL)兩大類，HL預(yù)后較好，治療主要以化療聯(lián)合放療為主，而NHL以其錯(cuò)綜復(fù)雜的異質(zhì)性而有著互不相同的生物學(xué)行為，根據(jù)其細(xì)胞來源可分為B和T細(xì)胞淋巴瘤。大部分NHL(85-90％)屬于前體或成熟B細(xì)胞淋巴瘤，而前體和成熟T細(xì)胞淋巴瘤卻

2、占據(jù)著不到15％的比例。其中Burkitt淋巴瘤和T細(xì)胞淋巴瘤都是高度侵襲性淋巴瘤，臨床發(fā)展迅速，預(yù)后較差，目前R-CHOP方案及其他常用的聯(lián)合化療方案難以達(dá)到滿意的緩解率，因此對(duì)于它們的治療仍需要更有效的藥物。
　　 硫化砷是中國傳統(tǒng)中藥雄黃的主要有效成分，上世紀(jì)90年代發(fā)現(xiàn)了我國傳統(tǒng)中藥雄黃治療急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)的特殊療效，隨后學(xué)者們進(jìn)行了以雄黃、青黛為主要成分的復(fù)方黃黛片包括基礎(chǔ)研究、Ⅱ期臨床研究及Ⅲ期臨床研究

3、的系列研究，而且也證明復(fù)方黃黛片治療APL的療效顯著、可靠，并具備良好的安全性。并且與三氧化二砷(As2O3，ATO)相比，以其可經(jīng)口服的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)而廣泛地應(yīng)用于APL患者。
　　 近些年來隨著聯(lián)合化療及利妥昔單抗（anti-CD20 monoclonal antibody,美羅華）的應(yīng)用，NHL尤其是B細(xì)胞NHL的預(yù)后得到了明顯的提高，而T細(xì)胞淋巴瘤尤其是諸如周圍T細(xì)胞淋巴瘤(peripheral T-cell lymphoma

4、，PTCL)仍以其易復(fù)發(fā)、難治的特點(diǎn)有著極低的緩解率和（或）治愈率，有研究表明PTCL患者在應(yīng)用以葸環(huán)類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療后中位生存期僅為20-30個(gè)月，而4-5年存活率僅為28％-38％。而包括濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma，F(xiàn)L)和邊緣帶淋巴瘤(marginalzone lymphoma, MZL)等在內(nèi)的惰性淋巴瘤雖然對(duì)初始化療有著較高的反應(yīng)率，但是它們對(duì)接下來的序貫化療反應(yīng)性很低。目前對(duì)于復(fù)發(fā)及難治性侵襲性淋

5、巴瘤和惰性淋巴瘤來說，其治療仍然僅限于依賴患者之前使用過的化療方案、一般情況、經(jīng)濟(jì)能力和臨床醫(yī)師的用藥經(jīng)驗(yàn)等，仍缺乏統(tǒng)一的一線方案。因此近些年來，大量的臨床及基礎(chǔ)研究都在緊鑼密鼓地進(jìn)行著以期能臨床治愈復(fù)發(fā)難治性NHL。
　　 有關(guān)三氧化二砷對(duì)非霍奇金淋巴瘤的臨床報(bào)道尚見，而硫化砷(As2S2)對(duì)非霍奇金淋巴瘤的作用尤其是對(duì)于分別來源于B和T細(xì)胞的淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)研究卻鮮有提及，本研究旨在研究探討硫化砷(As2S2)對(duì)NHL（T細(xì)胞和

6、B細(xì)胞）增殖和凋亡的影響，對(duì)比不同來源淋巴瘤細(xì)胞株對(duì)硫化砷作用的敏感性，并分別對(duì)淋巴瘤凋亡相關(guān)基因進(jìn)行定量測定，初步探討硫化砷對(duì)淋巴瘤細(xì)胞株作用的機(jī)制，為進(jìn)一步完善淋巴瘤的治療提供理論依據(jù)。同時(shí)本研究收集相關(guān)復(fù)發(fā)難治性NHL臨床資料，并進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)分析，以期為指導(dǎo)治療復(fù)發(fā)難治性NHL提供更多的臨床參考。
　　 第一部分:硫化砷(As2S2)對(duì)非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞株影響及機(jī)制的研究
　　 目的:本研究旨在探討我國傳統(tǒng)中藥雄黃

7、的主要成分——硫化砷(As2S2)分別對(duì)B淋巴瘤細(xì)胞株Raji和T淋巴瘤細(xì)胞株Jurkat的抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用及其機(jī)制。
　　 材料與方法:
　　 1.細(xì)胞株的培養(yǎng)
　　 2.As2S2干擾NHL細(xì)胞株后CCK-8法測定細(xì)胞增殖能力和流式細(xì)胞術(shù)法測量細(xì)胞凋亡率
　　 3.提取RNA，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time PCR,RT-PCR)
　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　

8、　 結(jié)果:
　　 1.As2S2可抑制Raji和Jurkat的增殖，其作用具有時(shí)間和濃度依賴性，尤其能較早較快地抑制Raji的增殖。3μM As2S2作用24h后Raji即達(dá)到47.64％的抑制率，作用72h后達(dá)到抑制率高峰(89.45％)，而Jurkat要達(dá)到48.11％的抑制率需要40μMAs2S2作用24h，并且50μMAs2S2作用于Jurkat72h的抑制率也只有75.69％。
　　 2.As2S2可促進(jìn)Ra

9、ji和Jurkat凋亡，其作用具有時(shí)間和濃度依賴性，尤其能較早較快地促進(jìn)Raji凋亡。4μM As2S2作用于Raji48h時(shí)凋亡率為52.50％，而30μM As2S2作用于Jurkat72h才能達(dá)到相同程度的凋亡率(53.93％)。
　　 3.As2S2可改變細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因(BAX，Bcl-2，Bcl-xl，c-Myc，PIM)的表達(dá)量，Raji和Jurkat基因的改變不一致。
　　 結(jié)論:
　　 1.A

10、s2S2能夠抑制B和T淋巴瘤細(xì)胞株增殖，其作用具有時(shí)間和濃度依賴性，B淋巴瘤細(xì)胞株較T淋巴瘤細(xì)胞株對(duì)As2S2更敏感。
　　 2.As2S2能夠誘導(dǎo)B和T淋巴瘤細(xì)胞株凋亡，其作用具有時(shí)間和濃度依賴性，B淋巴瘤細(xì)胞株較T淋巴瘤細(xì)胞株對(duì)As2S2更敏感。
　　 3.As2S2能夠抑制B和T淋巴瘤細(xì)胞株增殖并誘導(dǎo)其凋亡的機(jī)制可能與提高或降低細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)量，激活相關(guān)的凋亡途徑有關(guān)。
　　 第二部分復(fù)發(fā)難治性非

11、霍奇金淋巴瘤的治療
　　 目的:通過對(duì)臨床病例資料進(jìn)行分析，對(duì)比不同復(fù)發(fā)難治性非霍奇金淋巴瘤治療方案的療效及其不良反應(yīng)。
　　 方法:回顧性分析就診于山東省立醫(yī)院的33例臨床診斷為復(fù)發(fā)難治性非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者，分析其不同的方案選擇，比較其療效和相關(guān)不良反應(yīng)，并隨訪生存時(shí)間，SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.前體淋巴組織腫瘤組、成熟B細(xì)胞腫瘤組及成熟T細(xì)胞和NK細(xì)

12、胞腫瘤組三組病例的生存曲線無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 2.前體淋巴組織腫瘤組病例中應(yīng)用了E-CHOP、auto-HSCT、VPLT、VILP、ESHAP、Hyper-CVAD、微移植、預(yù)防性腰穿和鞘內(nèi)注射等方案可獲得較高的緩解率及較長的生存時(shí)間。在成熟B-細(xì)胞淋巴瘤病例中應(yīng)用R-DICE、RiPAD+C、吉西他濱+奧沙利鉑、R-hyperCVAD(A)和(B)交替使用、自體造血干細(xì)胞移植、E-CHOP、ESHAP、FM

13、D、VP+MTX+亞砷酸、VALP、COTP、COBP、DVD、CTHP、VIDP等方案之后可獲得較高的緩解率及較長的生存時(shí)間。而對(duì)于成熟T-細(xì)胞和NK細(xì)胞腫瘤的病例，目前我院尚無推薦的治療方案。
　　 3.在治療復(fù)發(fā)難治性NHL病例中應(yīng)充分考慮個(gè)體化治療原則。
　　 結(jié)論:
　　 1.前體淋巴組織腫瘤、成熟B細(xì)胞腫瘤及成熟T細(xì)胞和NK細(xì)胞腫瘤的生存時(shí)間無差異，這可能與復(fù)發(fā)難治性淋巴瘤患者本身復(fù)發(fā)難治的特點(diǎn)有關(guān)。