低劑量X線照射的MSCs對兔椎間盤退變的早期修復(fù)作用.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分:低劑量X線照射對離體的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響。
　　目的:對兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)體外培養(yǎng)、擴(kuò)增及鑒別,低劑量X線照射后經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測其細(xì)胞周期時相的分布及細(xì)胞凋亡,CCK-8檢測其增殖活性,并探討照射后的MSCs增殖活性與MAPK/ERK信號通路的關(guān)系,為進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:于脛骨結(jié)節(jié)處穿刺抽取5mL骨髓,在倒置顯微鏡下觀察其原代及傳

2、代后細(xì)胞狀態(tài),經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物CD34、CD44、CD90的表達(dá),證明是MSCs。以CCK-8法檢測照射后細(xì)胞的增殖情況,取增殖效應(yīng)最好的劑量組MSCs行Western-blot,觀察X線照射對MSCs的增殖性與MAPK/ERK信號通路的關(guān)系。
　　結(jié)果:體外成功培養(yǎng)并擴(kuò)增兔MSCs細(xì)胞,細(xì)胞高表達(dá)CD44、CD90、不表達(dá)CD34。CCK-8法檢測結(jié)果表明75mGy低劑量照射后,可明顯刺激MSCs的增殖,與假照射組

3、相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Western-blot顯示 X線照射后通過影響MAPK/ERK信號通路而刺激MSCs的增殖,與假照射組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:密度梯度法分離培養(yǎng)的細(xì)胞為MSCs,X線照射后影響其細(xì)胞周期并通過調(diào)節(jié)MAPK/ERK信號通路而刺激MSCs的增殖活性。
　　第二部分:低劑量X線照射的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對兔椎間盤退變的早期修復(fù)作用。
　　目的:探討低劑量X線照射的兔骨髓

4、間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)移植修復(fù)兔椎間盤退變的有效性。
　　方法:新西蘭白兔20只,隨機(jī)分為3組:1)正常組(n=4),不做任何處理;2)對照組(n=8),單純建立兔椎間盤退變模型;3)實(shí)驗(yàn)組(n=8),進(jìn)行退變模型建立并行低劑量X線照射的MSCs移植治療。移植入退變椎間盤后4周、6周,每個時間點(diǎn)正常組2只,對照組4只,實(shí)驗(yàn)組4只,行腰椎側(cè)位X線檢查,并計(jì)算椎間盤高度指數(shù)(DHI);腰椎MRI測量椎間盤T2加權(quán)像信號強(qiáng)度變化;HE

5、染色觀察椎間盤退變程度并分級;RT-PCR檢測椎間盤II型膠原及聚集蛋白聚糖的基因表達(dá)。
　　結(jié)果:DHI在正常組未見明顯下降,實(shí)驗(yàn)組及對照組可見輕度狹窄,但實(shí)驗(yàn)組DHI％與對照組相比具有差異(P<0.05)。MRI結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組與對照組椎間盤信號強(qiáng)度均有不同程度的下降,但實(shí)驗(yàn)組信號強(qiáng)度明顯強(qiáng)于對照組,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。組織學(xué)檢查結(jié)果顯示,對照組纖維環(huán)明顯紊亂;實(shí)驗(yàn)組纖維環(huán)結(jié)構(gòu)層狀結(jié)構(gòu)稍紊亂,可見新鮮的髓核組織,組