可注射型去端肽膠原包埋MSCs對免椎間盤退變的早期修復作用.pdf

1、第一部分：可注射型去端肽膠原包埋兔骨髓基質干細胞的體外培養(yǎng)
　　 目的：對兔骨髓基質干細胞(MSCs)進行體外培養(yǎng)、擴增及鑒別，并探討MSCs與去端肽膠原共同培養(yǎng)后MSCs的生長、存活情況，為進一步研究提供實驗基礎。
　　 方法：行脛骨穿刺抽取骨髓2mL，倒置顯微鏡下觀察其原代及傳代后細胞形態(tài)，使用流式細胞儀分析細胞表面標記物CD34、CD44、CD90。證明是骨髓基質干細胞后將其與可注射型去端肽膠原復合培養(yǎng)，使用倒置顯

2、微鏡、雙醋酸．碘化丙啶(FDA-PI)雙熒光染色觀察MSCs在凝膠內(nèi)的存活生長情況。
　　 結果：體外成功培養(yǎng)并擴增兔MSCs細胞，細胞高表達CD44、CD90、不表達CD34。倒置顯微鏡觀察見MSCs在凝膠內(nèi)生長良好，培養(yǎng)7天即出現(xiàn)少量典型長梭形形態(tài)；FDA-PI雙染色示MSCs在凝膠內(nèi)存活良好，培養(yǎng)14天存活率>99％，未見明顯死亡細胞。
　　 結論：經(jīng)密度梯度法分離培養(yǎng)的細胞是MSCs，同時MSCs在去端肽膠原凝膠

3、內(nèi)生長、存活良好，不影響其生物活性；去端肽膠原與MSCs具有良好的生物相容性。
　　 第二部分：可注射型去端肽膠原包埋骨髓基質干細胞對兔椎間盤退變的早期修復作用
　　 目的：探討兔骨髓基質干細胞(MSCs)復合可注射型去端肽膠原移植治療兔椎間盤退變的可行性，為后續(xù)的臨床研究提供實驗基礎。
　　 方法：新西蘭白兔20只，隨機分為3組：1）正常組(n=4)，不做任何處理；2）假手術組(n=8)，只針刺抽吸髓核法誘導椎

4、間盤退變模型；3）移植組(n=8)，進行退變模型建立并行MSCs-去端肽膠原復合物移植治療。將MSCs-去端肽膠原復合物注射移植入退變椎間盤后4周、6周，每個時間點正常組2只，假手術組4只，移植組4只，行腰椎側位X光片檢測椎間盤高度，并計算椎間盤高度指數(shù)(DHI)；腰椎MRI測量椎間盤T2加權像信號強度變化；大體觀察、HE染色觀察椎間盤退變程度并分級；RT-PCR檢測椎間盤II型膠原及聚集蛋白聚糖的基因表達。
　　 結果：DHI

5、在正常組未見明顯下降，移植組可見輕度狹窄，而假手術組明顯狹窄，移植組DHI%與其余各組間相比具有明顯差異(P＜0.05)。MRI結果顯示移植組與假手術組椎間盤信號強度均有不同程度的下降，但移植組信號強度明顯強于假手術組，且具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。大體觀察及組織學檢查結果顯示，假手術組椎間盤結構明顯退變，纖維環(huán)疤痕增生嚴重，髓核組織缺失。移植組纖維環(huán)結構稍紊亂，可見再生髓核組織。組織學評分提示移植組評分明顯優(yōu)于假手術組(P＜0.0