自身免疫性肝炎和原發(fā)性膽汁性肝硬化血清代謝組學(xué)初步研究.pdf

1、研究背景:
　　 自身免疫性肝炎(AIH)和原發(fā)性性膽汁性肝硬化(PBC)因臨床表現(xiàn)的不典型及常有重疊綜合征的發(fā)生，臨床診斷尚存在很多困難，發(fā)病機(jī)制未明，缺乏特異性化驗(yàn)手段，確診均需創(chuàng)傷性肝臟穿刺，故尋找其他研究自身免疫性肝病的機(jī)制和診斷方法的可能性就顯得尤為重要。
　　 肝臟為人體最主要的代謝器官，是三大物質(zhì)代謝的樞紐。肝臟如果有病理生理改變，與之相關(guān)的代謝勢(shì)必會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的變化。代謝組學(xué)是屬于系統(tǒng)生物學(xué)研究的新平臺(tái)，是

2、通過研究生物體系受到各種擾動(dòng)后各種代謝物質(zhì)發(fā)生的變化研究生命體。代謝組學(xué)研究中較常用的方法包括核磁共振(NMR)、氣相色譜-質(zhì)譜(GC/MS)、液相色譜-質(zhì)譜(LC/MS)。其中超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC)因?yàn)楦咝?、靈敏等優(yōu)點(diǎn)，得到越來越多地的應(yīng)用。代謝組學(xué)目前已在一些疾病的診斷、發(fā)病機(jī)制、預(yù)后判斷上得到初步研究應(yīng)用，如在腎細(xì)胞癌，膽管癌，食管癌以及糖尿病的診斷中表現(xiàn)優(yōu)秀。
　　 本研究運(yùn)用以UPLC/MS為基礎(chǔ)的血

3、液代謝組學(xué)研究方法對(duì)AIH和PBC的患者進(jìn)行了血液代謝組學(xué)的初步研究。通過研究自身免疫性肝炎(AIH)、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)患者與正常人間的血液代謝譜差異，尋找潛在的生物標(biāo)記物；為臨床診斷提供新的思路和方法，并嘗試建立AIH與PBC的代謝組學(xué)鑒別診斷模型。
　　 方法：選擇臨床診斷為AIH19例和PBC20例患者及正常健康人25例，應(yīng)用非靶向的線性梯度超高效液相色譜質(zhì)譜系統(tǒng)檢測(cè)血清中的小分子代謝物質(zhì)。對(duì)超高效液相色譜-質(zhì)

4、譜(UPLC/MS)的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行多變量數(shù)據(jù)分析，建立AIH和PBC鑒別診斷模型，并驗(yàn)證診斷模型的效力。篩選生物標(biāo)記物，并分析各組血清中生物標(biāo)志物的變化情況。
　　 結(jié)果：在負(fù)離子模式下自身免疫性肝炎和原發(fā)性膽汁性肝硬化的代謝圖譜明顯不同，構(gòu)建了可以鑒別診斷AIH和PBC的代謝組學(xué)偏最小二乘模型(PLS)，該模型解釋能力和預(yù)測(cè)能力都很好(R2Y=0.991，Q2=0.943)，ROC曲線下面積為1，包括4例AIH，4例PBC，4

5、例AIH-PBC重疊綜合癥患者在內(nèi)的外部驗(yàn)證結(jié)果顯示，AIH及PBC組分組完全正確，且AIH-PBc重疊癥標(biāo)本位于單獨(dú)的區(qū)域。共鑒定出了6類生物標(biāo)記物：膽汁酸(bileacids)，溶血卵磷脂(lysophosphatidylcholine，LPC)，卵磷脂(phosphatidylcholine，PC)，鞘磷脂(sphingomyelin，SM)，游離脂肪酸(freefattyacids，F(xiàn)FA)，苯丙氨酸(Phenylalanine

6、)。膽汁酸在疾病組血清含量升高，LPC，PC，SM，F(xiàn)FA在疾病組降低，PBC血清中以上物質(zhì)改變程度高于AIH，AIH-PBC重疊癥組物質(zhì)的改變介于AIH與PBC之間。苯丙氨酸僅在AIH組中較健康對(duì)照組升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：通過對(duì)自身免疫性肝炎患者、原發(fā)性膽汁性肝硬化患者和健康人群血清進(jìn)行代謝組學(xué)研究，結(jié)合多變量統(tǒng)計(jì)分析方法，發(fā)現(xiàn)代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)自身免疫性肝病的診斷及機(jī)制研究具有一定的幫助，是一種值得引起重視的研究疾病診