酒精性肝硬化和乙肝硬化患者血清代謝組學(xué)初步研究.pdf

1、研究背景：
　　 我國(guó)肝臟疾病發(fā)病率高,根據(jù)2006年全國(guó)乙型肝炎流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果,現(xiàn)有的慢性HBV感染者約9300萬(wàn)人,其中慢性乙型肝炎患者約2000萬(wàn)例,5年內(nèi)有10-20％的慢性乙型肝炎將進(jìn)展為肝硬化。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展,酒精引起的肝炎、肝硬化發(fā)病率近年也在增加。因此,針對(duì)酒精性肝硬化、乙肝肝硬化的早期診斷及發(fā)病機(jī)制的研究具有十分重要的意義。
　　 肝臟是機(jī)體最重要的代謝器官,是物質(zhì)代謝的樞紐。當(dāng)肝臟發(fā)生病理生

2、理改變時(shí),必然會(huì)引起與之相關(guān)的代謝網(wǎng)絡(luò)發(fā)生相應(yīng)的變化。代謝組學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)研究的一個(gè)新的平臺(tái),在制藥工業(yè)和臨床診斷等方面已得到了廣泛和有效的應(yīng)用。它通過(guò)考察生物體系(細(xì)胞、組織或生物體)受刺激或擾動(dòng)后(疾病或環(huán)境變化后),其代謝產(chǎn)物的變化或其隨時(shí)間的變化來(lái)研究生物體系。在臨床上,代謝組學(xué)目前已在一些疾病的診斷、發(fā)病機(jī)制、預(yù)后判斷上得到初步研究應(yīng)用。代謝組學(xué)研究常用的技術(shù)方法有核磁共振(NMR)氣相色譜-質(zhì)譜(GC/MS)、液相色譜-質(zhì)譜

3、(LC/MS)。其中超高效液相色譜質(zhì)譜相對(duì)于其他技術(shù)更加高效、快速、靈敏,越來(lái)越多的應(yīng)用于代謝組學(xué)研究,是一種穩(wěn)健的代謝組學(xué)研究工具。
　　 本研究應(yīng)用線性梯度的超高效液相色譜飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC/TOF/MS)在正離子模式下對(duì)酒精性肝硬化、乙肝肝硬化患者的血清進(jìn)行分析,對(duì)獲取的數(shù)據(jù)應(yīng)用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法聚類(lèi)分析法(OPLS)進(jìn)行模式識(shí)別,和正常健康組進(jìn)行比較,探索可用于酒精性肝硬化、乙肝肝硬化早期診斷的血

4、清生物標(biāo)志物。
　　 方法:酒精性肝硬化患者18例,乙肝肝硬化患者19例、健康對(duì)照人群22例,每例各取血清200μl,1∶3(v/v)和乙腈混合,渦旋,10000rpm離心10min,取上清液450μl。應(yīng)用超高效液相色譜質(zhì)譜(UPLC/MS)對(duì)酒精性肝硬化患者、乙肝肝硬化患者、健康對(duì)照組人群的血清萃取液進(jìn)行代謝組學(xué)分析,結(jié)合主成份分析、偏最小二乘法分析等多變量數(shù)據(jù)分析方法來(lái)研究不同原因引起的肝硬化患者血清代謝譜變化,評(píng)估代謝譜

5、對(duì)不同原因引起的肝硬化及早期肝硬化診斷的有效性。
　　 結(jié)果:建立了基于UPLC/MS的肝硬化患者血清代謝組學(xué)診斷模型。應(yīng)用該技術(shù)對(duì)酒精性肝硬化患者、乙肝肝硬化患者、健康人血清乙腈萃取液進(jìn)行代謝組學(xué)分析。對(duì)正常組與酒精性肝硬化、乙肝肝硬化患者血清代謝組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行主成份分析(principalcomponentsanalysis,PCA)分析,結(jié)果顯示正常組與酒精性肝硬化組、正常組與乙肝肝硬化組、酒精性肝硬化組與乙肝肝硬化組的代謝

6、指紋有顯著差別。進(jìn)一步運(yùn)用有監(jiān)督的正交偏最小方差判別分析(OrthogonalPartialleastsquares,OPLS)方法對(duì)3組樣本進(jìn)行重新建模,結(jié)果顯示正常組與不用原因引起的肝硬化組以及酒精性肝硬化和乙肝肝硬化患者之間能夠得到更好的區(qū)分。說(shuō)明主成份分析模型、有監(jiān)督的正交偏最小方差判別分析模型可以用于肝硬化的早期診斷以及酒精性肝硬化和乙肝肝硬化的鑒別診斷。對(duì)分組貢獻(xiàn)(VIP值)較大的小分子代謝物質(zhì)(＜1000Da)進(jìn)行了提取和

7、鑒定:肝硬化患者血清中溶血軟磷脂(LPC)LPCC16∶0,LPCC18∶0,LPCC18∶2,LPCC18∶3,LPCC20∶3,LPCC20∶5較健康組顯著性降低,甘膽酸、鵝脫氧甘膽酸、次黃嘌呤、硬脂酰胺較健康組顯著性升高,這組小分子物質(zhì)可以作為肝硬化診斷的“共同生物標(biāo)志物”。油酰胺、十四酰胺在酒精性肝硬化患者血清中升高,在乙肝肝硬化患者血清中降低,兩者之間的差異有顯著性。油酰胺、十四酰胺可以作為酒精性肝硬化和乙肝肝硬化診斷的“特異