GrB和PFP在胃癌中表達(dá)及意義與局部免疫狀態(tài)的初步研究.pdf

1、研究背景和目的:胃癌是消化道最常見(jiàn)的惡性腫瘤,其發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。一般認(rèn)為,胃黏膜上皮經(jīng)慢性萎縮性胃炎、腸上皮化生和非典型性增生之后,可能會(huì)發(fā)展為胃癌。當(dāng)腫瘤發(fā)生后,機(jī)體可通過(guò)免疫效應(yīng)機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用。近年來(lái)認(rèn)為,在抗腫瘤免疫效應(yīng)中,細(xì)胞免疫是抗腫瘤免疫的主力,體液免疫通常起協(xié)同作用。細(xì)胞免疫的效應(yīng)細(xì)胞主要為活化的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(Cytotoxic Tlymphocytes,CTL)和自然殺傷細(xì)胞(Nature killer c

2、ell,NK),它們可通過(guò)穿孔素(perforin,PFP)/顆粒酶B(granzymeB,GrB)介導(dǎo)的細(xì)胞毒途徑和Fas/Fas-L介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑發(fā)揮作用,其中PFP/GrB介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用是主要途徑。GrB是CTL和NK細(xì)胞中含量最豐富、發(fā)揮細(xì)胞毒作用最快且有效的顆粒酶,是主要的效應(yīng)分子。PFP是發(fā)揮細(xì)胞毒作用的另一特征性標(biāo)志物,它與GrB共存于活化的CTL和NK細(xì)胞胞漿中。GrB與PFP主要表達(dá)于CD4+CTL、CD8+CT

3、L及NK細(xì)胞,其中以CD8+CTL和NK細(xì)胞為主,故在腫瘤組織中浸潤(rùn)的GrB+和PFP+的淋巴細(xì)胞密度直接反映腫瘤局部免疫狀態(tài).
　　 近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn),GrB和PFP不僅存在于CTL和NK細(xì)胞中,而且也存在于其它一些細(xì)胞中,尤其值得關(guān)注的是在腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)GrB和PFP的表達(dá)。目前研究顯示,它們不僅可在一些淋巴腫瘤細(xì)胞中表達(dá),而且也發(fā)現(xiàn)GrB、PFP在人體乳腺癌和肺癌等上皮源性癌細(xì)胞中的表達(dá)。我們先前研究發(fā)現(xiàn),GrB在胃良

4、惡性組織中也有表達(dá),并認(rèn)為胃癌組織中表達(dá)的GrB可能發(fā)揮其細(xì)胞毒作用抑制周圍的局部免疫反應(yīng),但GrB+的胃癌細(xì)胞是否具有細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞(CLs)的生物學(xué)特征尚不清楚。
　　 胃黏膜是由多種不同結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞所構(gòu)成的一種十分復(fù)雜的上皮組織,由此發(fā)生的惡性腫瘤-胃癌是如何發(fā)生的?起源于哪一種細(xì)胞?起始部位何在?發(fā)生發(fā)展過(guò)程如何?這些問(wèn)題的解決有賴于進(jìn)行胃癌組織發(fā)生的研究。近年有研究顯示,胃癌細(xì)胞還可能起源于骨髓源性細(xì)胞(BMDC)

5、,提出了胃癌細(xì)胞非上皮起源的新學(xué)說(shuō)。
　　 在我們先前研究基礎(chǔ)上,本研究旨在探討GrB和PFP在胃癌中的表達(dá)情況及意義與局部免疫狀態(tài)的關(guān)系。全文分兩部分:在第一部分,主要探討PFP在良惡性胃上皮細(xì)胞是否亦有表達(dá)?其表達(dá)是否與GrB有共表達(dá)關(guān)系?旨在揭示GrB+胃癌細(xì)胞是否具有細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞樣的生物學(xué)表型特征。從而可能為胃癌細(xì)胞的非上皮起源學(xué)說(shuō)提供了強(qiáng)力佐證,為進(jìn)一步研究GrB+胃癌生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。在第二部分,主要探討在胃癌患

6、者其胃切緣-癌旁-癌組織中浸潤(rùn)的PFP+TIL細(xì)胞密度的變化,從而揭示胃癌局部免疫狀態(tài)的變化及其意義。方法:選取術(shù)前未進(jìn)行放療、化療、免疫治療及其它治療,經(jīng)外科行胃癌根治性或姑息性切除術(shù)后患者標(biāo)本35例,收集其相應(yīng)完整的臨床及病理學(xué)資料。采用免疫組織化學(xué)PV法同步檢測(cè)胃癌患者的切緣組織-癌旁組織-癌組織-相應(yīng)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中GrB與PFP蛋白的表達(dá)情況以及腫瘤周圍浸潤(rùn)PFP+TIL細(xì)胞數(shù)量及分布情況并結(jié)合臨床病理進(jìn)行分析。結(jié)果:第一部分

7、:1、GrB蛋白在胃切緣組織、癌旁組織、癌組織中均有表達(dá),陽(yáng)性率分別是40.00％(14/35),42.86％(15/35),48.57％(17/35),相互之間差異無(wú)顯著意義(P>0.05)；同步檢測(cè)PFP,發(fā)現(xiàn)在所有患者的胃切緣、癌旁、癌組織中PFP均為陰性表達(dá),僅見(jiàn)胃不同部位組織間質(zhì)中PFP+TIL細(xì)胞有散在表達(dá)可作陽(yáng)性內(nèi)對(duì)照；同時(shí)發(fā)現(xiàn)GrB+與GrB-胃癌組織對(duì)應(yīng)胃切緣組織、癌旁組織GrB表達(dá)率均有顯著性差異；2、GrB在胃癌組

8、織中的表達(dá)水平與患者的年齡、組織分化程度、浸潤(rùn)深度及TNM分期病理因素?zé)o顯著差異,(P>0.05)；而與患者的性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移兩組間的差異顯著,(P<0.05)。3、GrB在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶胃癌細(xì)胞中也有表達(dá),35例胃癌患者中共有23例淋巴轉(zhuǎn)移,GrB在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶胃癌中表達(dá)率為52.2％(12/23)。而相應(yīng)的原發(fā)癌灶中GrB表達(dá)率為26.1％(6/23),兩者之間無(wú)顯著差異,(P>0.05)。第二部分:1、在胃切緣組織、癌旁組織、癌組織

9、中均可看到不同程度浸潤(rùn)于組織間質(zhì)中的PFP+TIL細(xì)胞。切緣與癌旁比較(P<0.01)；癌組織與癌旁比較(P<0.01)；切緣與癌組織比較(P>0.05)。2、胃癌組織周圍浸潤(rùn)的PFP+TIL細(xì)胞密度在浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有顯著性差異,(P<0.05)。結(jié)論:根據(jù)目前實(shí)驗(yàn)結(jié)果GrB陽(yáng)性胃癌細(xì)胞不與PFP共表達(dá),即GrB在良惡性胃上皮細(xì)胞表達(dá)不依賴于PFP,未能證實(shí)GrB+胃癌細(xì)胞具有淋巴毒細(xì)胞表型,對(duì)于胃癌非上皮起源學(xué)說(shuō)(B