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文檔簡介
1、目的:1.運(yùn)用Meta分析的方法系統(tǒng)評價DAPK、RASSF1A和p16基因異常甲基化與肝細(xì)胞癌易感性的關(guān)系。2.探討beclin1、DAPK、RASSF1A及p16抑癌基因啟動子異常甲基化及聯(lián)合檢測在肝細(xì)胞癌早期診斷中的價值。
方法:1.Meta分析:(1)通過計算機(jī)檢索Pubmed、EMBASE、Ovid、Web of science、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(CBM)、中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫(VIP)、中國期刊全文數(shù)據(jù)庫(
2、CNKI)、萬方數(shù)據(jù)庫等,獲取DAPK、RASSF1A和p16基因異常甲基化與肝細(xì)胞癌病例對照研究的相關(guān)文獻(xiàn)。(2)根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)篩選文獻(xiàn)并提取數(shù)據(jù),運(yùn)用RevMan5.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。2.臨床病例研究:(1)收集瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肝膽外科2012年4月-2013年6月收治并進(jìn)行手術(shù)切除的肝細(xì)胞癌(HCC)患者組織37例,同時選取肝細(xì)胞癌患者相應(yīng)匹配非癌組織(noncancerous tissue,NCT)(距離癌組織>3 cm
3、),以及5例正常肝組織(取自手術(shù)治療的肝血管瘤旁組織)。(2)采用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR,MSP)法,檢測37例肝癌組織、相應(yīng)匹配非癌組織及正常肝組織中beclin1、RASSF1A、p16和DAPK四種基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)。(3)通過與外周血甲胎蛋白AFP的單一ROC曲線分析及其逐步Logistic回歸的ROC曲線下面積,對單一及組合方式的敏感性、特異性、Youden指數(shù)和陽性似然比/陰
4、性似然比進(jìn)行比較分析。結(jié)果:1.Meta分析:(1)共納入研究文獻(xiàn)31篇, DAPK基因納入3項研究,累計病例314例,其中HCC組134例,對照組180例;RASSF1A基因納入15項研究,累計病例1417例,其中HCC組710例,對照組707例;p16基因納入23項研究,累計病例2245例,其中HCC組1106例,對照組1139例。(2)癌組織中DAPK甲基化陽性率顯著高于正常肝組織[OR=6.69,95%CI(2.43~18.41
5、),P<0.05],相比癌旁組織[OR=0.87,95%CI(0.47~1.59),P>0.05]與肝硬化組織[OR=0.21,95%CI(0.01~8.56),P>0.05]并無顯著性差異;RASSF1A在肝細(xì)胞癌組織中甲基化陽性率均顯著高于正常肝組織[OR=50.23,95%CI(22.21~113.61)、P<0.05]、癌旁組織[OR=7.63,95%CI(3.38~17.22),P<0.05]及肝硬化組織[OR=17.18,9
6、5%CI(2.57~114.91),P<0.05];p16在肝細(xì)胞癌組織中甲基化陽性率均顯著高于正常肝組織[OR=21.18,95%CI(9.75~46.00),P<0.05]、非癌組織[OR=7.97,95%CI(4.64~13.68),P<0.05]及肝硬化組織[OR=6.18,95%CI(4.16~9.18),P<0.05]。2.臨床病例研究:(1)肝癌組織中beclin1、RASSF1A、p16和DAPK基因啟動子區(qū)甲基化檢出率
7、分別為5.4%、94.6%、73.0%和35.1%,相應(yīng)癌旁組織中甲基化率分別為0%、35.1%、24.3%和10.8%,5例正常肝組織均未檢出基因甲基化改變。RASSF1A、p16和DAPK基因在肝細(xì)胞癌組織中的甲基化率均明顯高于相應(yīng)的癌旁組織(P<0.05)。(2)肝癌組織中beclin1、RASSF1A、p16和DAPK基因的甲基化發(fā)生率與患者性別、年齡、腫瘤TNM分期以及有無HBV感染均無顯著性差異,但RASSF1A異常甲基化在
8、腫瘤體積較大者組織中檢出率更高(x2=6.578,P<0.05),DAPK基因甲基化在AFP<400μg/L的肝癌患者組織中陽性率更高(x2=5.106,P<0.05)。(3) RASSF1A基因啟動子區(qū)甲基化和AFP聯(lián)合檢測可獲得較高的敏感度(81.8%)和特異度(93.0%),曲線下面積最大(0.913),并獲得高于單一基因甲基化的特異性、Youden指數(shù)、陽性似然比/陰性似然比。結(jié)論:1.經(jīng)Meta分析得出,DAPK、RASSF1
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