DON、ZEA聯(lián)合染毒對體外培養(yǎng)豬脾臟淋巴細胞凋亡及氧化損傷的研究.pdf

1、SichuanAgriculturalUniversityDISSERTATIONSnbmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementforMASTERDEGREE—l‘●●’一’ResearchonoxidativemluryandapoptosisOncombinedeffectsofDeoxynivalenolandZearalenoneonporcine‘一一●‘一spleniclympho

2、cytesinvitrocultureByZhenLiangDirectedbyProfJunliangDengChengdu，SichUan，ChinaJune2016摘要脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)、玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEAl是飼料中兩種最常見的霉菌毒素。DON、ZEA不僅降低飼料營養(yǎng)價值、降低動物生長和繁殖性能，而且還損傷機體免疫能力，導致疾病。霉菌毒素的免疫毒性日漸受到重視。本研

3、究以原代培養(yǎng)豬脾臟淋巴細胞為模型，應用CCK，8法測得豬脾臟淋巴細胞染毒48h后，DON、ZEA的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為148士02099／mL和203土03lgg／mL，表明DON、ZEA均能夠影響豬脾臟淋巴細胞的增殖活性。在此基礎上設計DON單獨染毒劑量水平為0061tg／mL、031tg／mL、1599／mL、7599／mL，ZEA單獨染毒劑量水平為00899／mL、0499／mL、299／mL、1099／mL，DON和Z

4、EA聯(lián)合染毒劑量為O0699／mL和008肛g／mL、0399／mL和0499／mL、1599／mL和299／mL，另設對照組。豬脾臟淋巴細胞單獨或聯(lián)合染毒DON、ZEA48h后，檢測抗氧化功能、細胞凋亡、凋亡相關基因p53、Bcl2、Bax、Caspase3及Caspase8mRNA表達水平及培養(yǎng)液上清中相關的凋亡基因蛋白含量，以此來探知DON、ZEA單獨或聯(lián)合染毒對豬脾臟淋巴細胞凋亡和氧化損傷的影響及機制，為闡明其免疫毒性機制提供依

5、據(jù)。試驗結果：(1)與對照組比較，除DON、ZEA單獨染毒最低劑量組個別指標外，其余染毒組SOD、CAT、GSHPx活性和GSH含量均顯著降低(尸O05或P001)，MDA含量極顯著增加(尸O01)，且具有一定劑量依賴關系；聯(lián)合染毒組對5個指標的作用效應大于相應劑量單獨染毒組，呈亞加性效應。(2)DON、ZEA單獨染毒組細胞凋亡率均極顯著高于對照組(PO01)，且呈劑量依賴效應；聯(lián)合染毒組中細胞凋亡率均極顯著高于相應的單獨染毒組(P00

6、1)，表現(xiàn)出亞加性效應。(3)與對照組比較，除DON、ZEA單獨染毒最低劑量組個別指標外，各染毒組p53、Bax、Caspase3及Caspase一8含量和mRNA表達水平均顯著增加(尸O05或P001)，而Bcl一2含量和mRNA表達水平則顯著降低(尸O05或P001)，這種變化呈現(xiàn)劑量依賴關系；聯(lián)合染毒組對上述指標的影響大于相應劑量單獨染毒組，呈亞加性效應。結論：(1)DON、ZEA單獨染毒可劑量依賴性導致體外培養(yǎng)的豬脾臟淋巴細胞氧