DON、ZEA聯(lián)合染毒對體外培養(yǎng)豬脾臟淋巴細(xì)胞凋亡及氧化損傷的研究.pdf

1、SichuanAgriculturalUniversityDISSERTATIONSnbmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementforMASTERDEGREE—l‘●●’一’ResearchonoxidativemluryandapoptosisOncombinedeffectsofDeoxynivalenolandZearalenoneonporcine‘一一●‘一spleniclympho

2、cytesinvitrocultureByZhenLiangDirectedbyProfJunliangDengChengdu，SichUan，ChinaJune2016摘要脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)、玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEAl是飼料中兩種最常見的霉菌毒素。DON、ZEA不僅降低飼料營養(yǎng)價(jià)值、降低動(dòng)物生長和繁殖性能，而且還損傷機(jī)體免疫能力，導(dǎo)致疾病。霉菌毒素的免疫毒性日漸受到重視。本研

3、究以原代培養(yǎng)豬脾臟淋巴細(xì)胞為模型，應(yīng)用CCK，8法測得豬脾臟淋巴細(xì)胞染毒48h后，DON、ZEA的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為148士02099／mL和203土03lgg／mL，表明DON、ZEA均能夠影響豬脾臟淋巴細(xì)胞的增殖活性。在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)DON單獨(dú)染毒劑量水平為0061tg／mL、031tg／mL、1599／mL、7599／mL，ZEA單獨(dú)染毒劑量水平為00899／mL、0499／mL、299／mL、1099／mL，DON和Z

4、EA聯(lián)合染毒劑量為O0699／mL和008肛g／mL、0399／mL和0499／mL、1599／mL和299／mL，另設(shè)對照組。豬脾臟淋巴細(xì)胞單獨(dú)或聯(lián)合染毒DON、ZEA48h后，檢測抗氧化功能、細(xì)胞凋亡、凋亡相關(guān)基因p53、Bcl2、Bax、Caspase3及Caspase8mRNA表達(dá)水平及培養(yǎng)液上清中相關(guān)的凋亡基因蛋白含量，以此來探知DON、ZEA單獨(dú)或聯(lián)合染毒對豬脾臟淋巴細(xì)胞凋亡和氧化損傷的影響及機(jī)制，為闡明其免疫毒性機(jī)制提供依

5、據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果：(1)與對照組比較，除DON、ZEA單獨(dú)染毒最低劑量組個(gè)別指標(biāo)外，其余染毒組SOD、CAT、GSHPx活性和GSH含量均顯著降低(尸O05或P001)，MDA含量極顯著增加(尸O01)，且具有一定劑量依賴關(guān)系；聯(lián)合染毒組對5個(gè)指標(biāo)的作用效應(yīng)大于相應(yīng)劑量單獨(dú)染毒組，呈亞加性效應(yīng)。(2)DON、ZEA單獨(dú)染毒組細(xì)胞凋亡率均極顯著高于對照組(PO01)，且呈劑量依賴效應(yīng)；聯(lián)合染毒組中細(xì)胞凋亡率均極顯著高于相應(yīng)的單獨(dú)染毒組(P00

6、1)，表現(xiàn)出亞加性效應(yīng)。(3)與對照組比較，除DON、ZEA單獨(dú)染毒最低劑量組個(gè)別指標(biāo)外，各染毒組p53、Bax、Caspase3及Caspase一8含量和mRNA表達(dá)水平均顯著增加(尸O05或P001)，而Bcl一2含量和mRNA表達(dá)水平則顯著降低(尸O05或P001)，這種變化呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系；聯(lián)合染毒組對上述指標(biāo)的影響大于相應(yīng)劑量單獨(dú)染毒組，呈亞加性效應(yīng)。結(jié)論：(1)DON、ZEA單獨(dú)染毒可劑量依賴性導(dǎo)致體外培養(yǎng)的豬脾臟淋巴細(xì)胞氧