亞硒酸鈉對(duì)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇致體外培養(yǎng)豬脾臟淋巴細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：
　　本研究通過(guò)體外原代培養(yǎng)豬脾臟淋巴細(xì)胞，單獨(dú)/聯(lián)合添加脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)、亞硒酸鈉(Na2SeO3)，探討Na2SeO3對(duì)DON致豬脾臟淋巴氧化損傷的保護(hù)作用。
　　方法:
　　(1)通過(guò)分別添加不同濃度DON(0.0625μg/mL、0.125μg/mL、0.25μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL)、Na2SeO3(

2、0.25μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L)，體外原代培養(yǎng)豬脾臟淋巴細(xì)胞48h后，采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力，計(jì)算DON致豬脾臟淋巴細(xì)胞IC50及Na2SeO3作用于豬脾臟淋巴細(xì)胞最適營(yíng)養(yǎng)濃度。
　　(2)正式試驗(yàn)分10組，分別為D1(DON824 ng/mL)，D2（DON412 ng/mL），D3(DON206 ng/mL), D4(DON103

3、 ng/mL),S(Na2SeO32μmol/L), SD1(Na2SeO32μnmol/L+DON824 ng/mL),SD2(Na2SeO32μmol/L+ DON412 ng/mL),SD3(Na2SeO32μmol/L+DON206 ng/mL), SD4(Na2SeO32μmol/L+ DON103 ng/mL),對(duì)照組，于體外培養(yǎng)豬脾臟淋巴細(xì)胞6、12、24和48h后，分別檢測(cè)細(xì)胞活力，細(xì)胞培養(yǎng)上清液乳酸脫氫酶(LDH)活性

4、，細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)活性，細(xì)胞總抗氧化能力(T-AOC)和抑制羥自由基能力，細(xì)胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和過(guò)氧化氫(H2O2)含量。
　　結(jié)果:
　　(1)培養(yǎng)48h后，與對(duì)照組相比，除0.0625μg/mL組外，其余各試驗(yàn)組均極顯著降低豬脾臟淋巴細(xì)胞活力(P＜0.01)，并得出DON致豬脾臟淋巴細(xì)胞IC50為0.82+0.35μg/mL; Na2S

5、eO3在0.25～4μmol/L能夠顯著提高脾臟淋巴細(xì)胞活力(P＜0.01)，其濃度提高到16μmol/L時(shí)明顯降低細(xì)胞活力（P＜0.01），并得出Na2SeO3最適營(yíng)養(yǎng)濃度為2μmol/L。
　　(2)單獨(dú)添加DON作用于豬脾臟淋巴細(xì)胞，與對(duì)照組相比，除D4組個(gè)別指標(biāo)外，其余各組細(xì)胞上清液LDH活性，MDA和H2O2含量均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）;細(xì)胞活力，GSH含量，GPx、SOD、CAT活性，T-AOC和抑制羥

6、自由基能力均明顯下降（P＜0.05或P＜0.01）。
　　(3)單獨(dú)添加Na2SeO3作用于豬脾臟淋巴細(xì)胞，與對(duì)照組相比，細(xì)胞活力、細(xì)胞GPx活性（12、24和48h）、T-AOC和抑制羥自由基能力均明顯提高(P＜0.05或P＜0.01)，細(xì)胞H2O2含量（12和24 h）、MDA含量（24和48h）均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。
　　(4)聯(lián)合添加DON和Na2SeO3作用于豬脾臟淋巴細(xì)胞，在整個(gè)試驗(yàn)期間，與單

7、獨(dú)添加DON組相比，聯(lián)合添加DON和Na2SeO3組細(xì)胞活力、抗氧化酶(GPx、SOD、CAT)活性、T-AOC、細(xì)胞抑制羥自由基能力、GSH含量均提高，細(xì)胞內(nèi)MDA和H2O2含量、培養(yǎng)上清液LDH活性均下降。其中，在24 h時(shí)，與單獨(dú)添加DON組相比，聯(lián)合添加DON和Na2SeO3組細(xì)胞活力(SD3和SD4組)、GSH含量、GPx活性(SD1組除外)、SOD活性（SD3和SD4組）、CAT活性（SD3和SD4組）、T-AOC及抑制羥自

8、由基能力（SD3組除外）均明顯提高（P＜0.05或P＜0.01），細(xì)胞內(nèi)H2O2和MDA含量及上清液LDH活性均明顯下降（P＜0.05或P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　DON暴露能夠?qū)е仑i脾臟淋巴細(xì)胞抗氧化功能降低，導(dǎo)致細(xì)胞活力下降。0.25～4μmol/LNa2SeO3能夠明顯提高淋巴細(xì)胞活力，16μmol/L Na2SeO3則對(duì)豬脾臟淋巴細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。在本試驗(yàn)條件下，2μmol/L的Na2SeO3對(duì)DON誘導(dǎo)的豬脾