16-24周孕齡人胎肝細(xì)胞核蛋白質(zhì)表達(dá)譜的構(gòu)建.pdf

1、16-24周孕齡的人胎肝是一個(gè)處于發(fā)育時(shí)相的器官,不僅擔(dān)負(fù)著物質(zhì)代謝、蛋白分泌等重要生理功能,而且具有造血的機(jī)能,采用蛋白質(zhì)組學(xué)研究手段系統(tǒng)發(fā)掘胎肝內(nèi)蛋白信息將助于進(jìn)一步了解胎肝機(jī)能.在蛋白質(zhì)組研究中,低豐度蛋白是研究的主要瓶頸,目前解決的方法主要有兩類(lèi),一是去除樣品中的高豐度蛋白質(zhì);二是對(duì)樣品進(jìn)行分級(jí),簡(jiǎn)化樣品的復(fù)雜性.由于真核生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)的特殊性,使得亞細(xì)胞分級(jí)得以實(shí)現(xiàn),通過(guò)這種方法既可以降低樣品的復(fù)雜性又可實(shí)現(xiàn)通量化.該文通過(guò)蔗糖

2、密度梯度離心的方法建立了細(xì)胞核蛋白提取的平臺(tái),采用免疫印跡、酶活測(cè)定和電鏡的方式來(lái)觀測(cè)細(xì)胞核提純的程度,結(jié)果表明細(xì)胞核富集了5倍以上.在此基礎(chǔ)上又根據(jù)蛋白的性質(zhì)采用試劑盒進(jìn)行進(jìn)一步細(xì)化的分級(jí),分為疏水、親水和沉淀三部分.最后采用一維凝膠電泳和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)鑒定,總共獲得422個(gè)總蛋白數(shù)據(jù),其中明確定位于細(xì)胞核的蛋白145個(gè),由基因組推測(cè)的新蛋白共有16個(gè)以及9個(gè)SWISS-PROT注釋表明在肝臟中處于低豐度的蛋白.我們還對(duì)所得數(shù)據(jù)