人宮頸鱗狀上皮永生化細(xì)胞和癌細(xì)胞的核蛋白質(zhì)組及微管蛋白比較分析.pdf

1、目的：對(duì)比分析HPVl6陽性的人宮頸鱗狀上皮永生化細(xì)胞(H8細(xì)胞株)和宮頸癌細(xì)胞(Caski細(xì)胞株)核蛋白質(zhì)組和骨架蛋白α、β、γ-微管蛋白的表達(dá)籌異，識(shí)別并鑒定核蛋白質(zhì)組差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，為宮頸癌癌變機(jī)制和抗癌藥物靶點(diǎn)的選擇提供亞細(xì)胞層面的信息。 方法：①采用MERCK公司亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)提取試劑盒Calbiochem(R)分步提取H8細(xì)胞和Caski細(xì)胞的核蛋白和骨架蛋白。②利用固相pH梯度(immobilized pH g

2、radient，IPG)雙向凝膠電泳(2-dimensronai gel electrophoresis，2-DE)分別獲得兩株細(xì)胞的核蛋白雙向電泳圖譜，圖像分析篩選差異表達(dá)蛋白斑點(diǎn)，MALDI-TOF-MS鑒定蛋白質(zhì)。③采用免疫細(xì)胞化學(xué)SP法檢測(cè)α、β-微管蛋白在H8細(xì)胞和Caski細(xì)胞中的表達(dá)差異，并用Western blotting對(duì)骨架蛋白α、β、γ-微管蛋白在兩株細(xì)胞中的表達(dá)水平進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果：①?gòu)腍8細(xì)胞和C

3、aski細(xì)胞的細(xì)胞核蛋白2-DE圖譜中篩選出30個(gè)候選籌異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，質(zhì)譜鑒定出9個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，其中6個(gè)(INT6、TRAl6、PP4C、CDK6、ANRl6、ZN211)在Caski中高表達(dá)，3個(gè)(MYSTI、LMNA、TIAFl)在Caski細(xì)胞中低表達(dá)。②Caski細(xì)胞巾α、β-微管蛋白表達(dá)水平高于H8細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。半定量分析α、β、γ-微管蛋白，在Caski細(xì)胞中的表達(dá)量高于H8細(xì)胞(P＜

4、0.05)。 結(jié)論：①人宮頸鱗狀上皮永生化細(xì)胞(H8)和宮頸癌細(xì)胞(Caski)核蛋白質(zhì)組差異表達(dá)分析，篩選出TIAF1、TRAl6、PP4C、CDK6、.ANRl6、ZN211 6個(gè)蛋白在Caski細(xì)胞核高表達(dá)，MYST1、INT6、LMNA3個(gè)蛋白在Caski細(xì)胞核低表達(dá)。它們可能通過加速細(xì)胞周期、促進(jìn)中心體成熟和細(xì)胞核分裂、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、抗凋亡等途徑促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)化與增殖。這9個(gè)蛋白可能成為宮頸癌新的標(biāo)記物或者治療靶

5、點(diǎn)，為宮頸癌及癌前病變的診斷提供幫助。②微管蛋白是真核細(xì)胞中普遍存在的結(jié)構(gòu)，中心體異常和染色體不穩(wěn)定是腫瘤細(xì)胞的普遍特征，中心體微管蛋白較其他功能微管蛋白隨細(xì)胞周期變化活躍。目前尚無提純中心體的成熟技術(shù)，我們通過免疫組化和免疫印跡用α、β、γ-微管蛋白的表達(dá)來推測(cè)中心體的表達(dá)情況，探討中心體蛋白水平異常在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的意義，結(jié)果顯示Caski細(xì)胞的α、β、γ-微管蛋白的表達(dá)量顯著高于H8細(xì)胞，即癌細(xì)胞的中心體數(shù)目多、PCM過多聚集，