同一地區(qū)宮頸-食管鱗狀細(xì)胞癌患者人乳頭狀瘤病毒感染特征和蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、1.研究背景
　　 宮頸癌（cervical carcinoma）是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，在全球女性惡性腫瘤中的發(fā)病率僅次于乳腺癌，在我國(guó)其發(fā)病率一直居?jì)D科腫瘤首位。流行病學(xué)研究提示宮頸癌高發(fā)區(qū)常伴較高的食管癌發(fā)病率，如山西陽(yáng)城、新疆石河子、河南豫北地區(qū)，且在河南地區(qū)子宮頸癌在女性是僅次于食管癌的第二位惡性腫瘤。宮頸癌和食管癌好發(fā)部位均發(fā)生在與外界相通的鱗狀上皮和柱狀上皮交界部位，兩者組織學(xué)類(lèi)型均以鱗狀細(xì)胞癌為主，宮頸鱗癌

2、（cervical squamous cell carcinoma，CSCC）約占80％～85％，食管鱗癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）約占90％～95％。宮頸癌和食管癌的形態(tài)學(xué)發(fā)病模式相似：宮頸癌為：基底細(xì)胞損傷-宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia.CIN）CINⅠ-CINⅡ-CINⅢ-原位癌-浸潤(rùn)癌；食管癌：食管粘膜上皮基底細(xì)胞過(guò)度

3、增生（basal cell hyperplasia，BCH）、不典型增生（dysplasia，DYS）和原位癌（carcinoma in situ，CIS）-浸潤(rùn)癌；是一個(gè)多階段進(jìn)行性過(guò)程可有逆向性轉(zhuǎn)變，這些形態(tài)學(xué)改變是CSCC和ESCC高易感人群癌變過(guò)程的重要特征。
　　 以上現(xiàn)象提示這兩種腫瘤可能具有相似的致病危險(xiǎn)因素和發(fā)病機(jī)制，人乳頭瘤病毒（human pappillomavirus，HPV）感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌發(fā)

4、生的必要因素，過(guò)去二十年的研究證明HPV在宮頸癌變機(jī)制中起著很重要的作用，盡管HPV在食管癌發(fā)病機(jī)制的研究中已有報(bào)道，但具體的致癌作用仍不清楚。有關(guān)比較同一地區(qū)兩種腫瘤HPV感染率的研究未見(jiàn)報(bào)道。
　　 蛋白質(zhì)組學(xué)的興起為癌癥機(jī)制的研究提供了理想的技術(shù)平臺(tái)，對(duì)尋找其相關(guān)生物標(biāo)記，探討其發(fā)病機(jī)制，開(kāi)發(fā)新的藥物等有著重要的意義，MALDI-TOF-MS（matrix assisted laser desorption ionizat

5、ion time of flight mass spectrometry，基質(zhì)輔助激光解析附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜）是一種檢測(cè)大量多肽和蛋白質(zhì)的獨(dú)特方法，特別在識(shí)別反應(yīng)生物機(jī)理和細(xì)胞途徑狀態(tài)的復(fù)雜蛋白質(zhì)組圖譜方面成效顯著，具有靈敏度高，分辨率高，準(zhǔn)確度高，圖譜簡(jiǎn)明，樣品用量少和高通量，質(zhì)量范圍廣及速度快等特點(diǎn)。
　　 弱陽(yáng)離子交換磁珠（MB-WCX）捕獲低豐度蛋白，借助于MALDI-TOF-MS技術(shù)的自動(dòng)操作程序以同時(shí)檢測(cè)血清中存在的

6、各種肽段，此系統(tǒng)的靈敏性?xún)?yōu)于芯片表面俘獲，因?yàn)榍驙铑w粒的結(jié)合表面積較小直徑斑點(diǎn)更大，因此結(jié)合能力也更強(qiáng)。與高分辨率MS聯(lián)用時(shí)，可同時(shí)檢測(cè)一滴血清中的數(shù)百種肽段，并且多數(shù)可不經(jīng)再次分級(jí)而直接測(cè)定。這一自動(dòng)化特性使得操作方便，并保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性。
　　 本課題組首先采用PCR和凱普導(dǎo)流雜交HPV DNA檢測(cè)法（HybriMax）技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用，以了解宮頸鱗癌和食管鱗癌同時(shí)高發(fā)的地區(qū)這一特殊人群的HPV感染情況，而后采用MB-WC

7、X、MALDI-TOF-MS及相關(guān)軟件對(duì)來(lái)自同一地區(qū)的宮頸鱗癌、食管鱗癌血清蛋白質(zhì)質(zhì)譜進(jìn)行比較研究，建立各自的蛋白質(zhì)指紋圖譜，篩選各自腫瘤相關(guān)蛋白，并進(jìn)行對(duì)比分析，最后用免疫組化方法和MSP方法驗(yàn)證候選蛋白在宮頸鱗癌和食管鱗癌及其癌旁正常組織中蛋白表達(dá)及基因甲基化特征，為宮頸鱗癌、食管鱗癌的基礎(chǔ)研究、臨床診斷以及特異性腫瘤標(biāo)志物的篩選提供重要的理論依據(jù)。
　　 2.材料與方法
　　 2.1研究對(duì)象
　　 2.2樣

8、本（血清、組織）的收集
　　 2.3方法
　　 3.結(jié)論
　　 3.1同一地區(qū)居民宮頸、食管鱗癌HPV感染亞型和頻率非常相似，提示HPV可能是這2種腫瘤的共同致病因素，HPV16可能在宮頸和食管癌變過(guò)程中起重要作用，為該2種腫瘤的生物防治提供了重要理論依據(jù)。
　　 3.2在宮頸鱗癌組、食管鱗癌組分別與對(duì)照組蛋白質(zhì)組對(duì)比發(fā)現(xiàn)M1865.58，M2104.84，M4070.93，M4209.83的蛋白在兩種腫

9、瘤中均表達(dá)下調(diào)，而質(zhì)荷比為M5756.02的蛋白表達(dá)上調(diào)，提示該5種蛋白為宮頸、食管鱗癌的重要候選蛋白，同時(shí)提示該地區(qū)宮頸、食管鱗癌之間存在相似的分子基礎(chǔ)。
　　 3.3在宮頸上皮內(nèi)瘤變組、食管上皮不典型增生組蛋白質(zhì)對(duì)比發(fā)現(xiàn)M2660.1，M4209.83的蛋白在兩種腫瘤癌前病變組中均表達(dá)下調(diào)，M2862.82，M1349.67，M1740.76的蛋白均表達(dá)上調(diào)。提示該5種蛋白為2種腫瘤癌前病變的重要候選蛋白，同時(shí)提示在宮頸癌和

10、食管癌的發(fā)生發(fā)展中存在相似的分子基礎(chǔ)。
　　 3.4通過(guò)對(duì)宮頸鱗癌和食管鱗癌不同病理分期的蛋白質(zhì)組分析，發(fā)現(xiàn)M5904.14，M5264.26的2種蛋白與宮頸鱗癌分化程度密切相關(guān)，M6526.86的蛋白與食管鱗癌病理分期密切相關(guān)的蛋白質(zhì)，提示這些蛋白是宮頸鱗癌和食管鱗癌預(yù)后的重要分子基礎(chǔ)。
　　 3.5 CK14和Gastrin蛋白在正常組織中低表達(dá)，在宮頸鱗癌和食管鱗癌中高表達(dá)，與血清蛋白質(zhì)譜結(jié)果一致，且與甲基化結(jié)果呈