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文檔簡介
1、ZBTB蛋白家族是一類含有BTB/POZ結(jié)構(gòu)域和C2H2 Küppel鋅指基序的DNA結(jié)合蛋白,具有基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能,在細(xì)胞增殖、分化、凋亡和功能調(diào)節(jié)等生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用。本實驗室通過RT-PCR技術(shù)克隆獲得了一個ZBTB家族成員ZBTB1(NM_001123329.1)。實驗室前期研究表明ZBTB1位于14號染色體上,定位在14q23.3,含有2142bp的開放式閱讀框,編碼一個713個氨基酸組成的蛋白質(zhì)。同源性分析顯示,ZBT
2、B1的N端BTB/POZ結(jié)構(gòu)域和C端C2H2型ZNF結(jié)構(gòu)域與其他鋅指蛋白家族成員有較高的同源性。亞細(xì)胞定位分析顯示ZBTB1定位于細(xì)胞核,且呈斑點狀分布。
蛋白質(zhì)間的相互作用存在于機(jī)體每個細(xì)胞的生命活動中,絕大多數(shù)生命活動都是通過蛋白間的相互作用來實現(xiàn)的。對生命活動中的蛋白質(zhì)間相互作用的研究有助于我們解決許多生命研究中的關(guān)鍵問題。我們通過酵母雙雜交技術(shù)(yeast two hybrid)從人胎腦文庫中篩選與 ZBTB1相互作用
3、的蛋白質(zhì),經(jīng)測序整理后獲得了23種與ZBTB1存在互作的新蛋白,并對其中一種蛋白MAPT進(jìn)行了后續(xù)驗證研究。
我們成功的構(gòu)建出了pCMV-HA-ZBTB1、pCMV-Myc-MAPT重組載體,并在哺乳動物細(xì)胞中有效表達(dá)。經(jīng)過免疫共沉淀實驗驗證,在293T細(xì)胞中ZBTB1和MAPT存在蛋白間的相互作用。我們的實驗驗證了兩種蛋白的互作。
同時,基于實驗室的另一個研究方向,我們進(jìn)行病例-對照研究分析了基因組中相關(guān)基因的插入
4、缺失多態(tài)性與疾病的相關(guān)性。通過閱讀文獻(xiàn),我們選取RTN4基因上CAA(rs34917480)插入/缺失多態(tài)性與肺癌的易感性進(jìn)行了研究。CAA插入/缺失多態(tài)性位點位于RTN4基因的3’端非編碼區(qū)域。為了研究此多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系,我們收集了411例肺癌患者血液樣本和478例正常人血液樣本進(jìn)行研究。所有樣本經(jīng)過PCR-聚丙烯酰胺凝膠電泳后統(tǒng)計基因分型。經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析顯示 CAA插入/缺失多態(tài)性在兩組樣本中具有顯著差異(OR=1.375,
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