宮頸癌原代細(xì)胞的分離及腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物的檢測(cè).pdf

1、背景與目的:
　　宮頸癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤之一，盡管人類從未停止過對(duì)宮頸癌的研究，并取得了很大突破，但是宮頸癌仍是嚴(yán)重威脅廣大婦女身心健康的危險(xiǎn)因素之一。隨著腫瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)的興起，宮頸癌干細(xì)胞的研究也逐漸起步，研究人員試圖通過尋找宮頸癌干細(xì)胞為宮頸癌的診治開辟新路。標(biāo)記物的研究是宮頸癌干細(xì)胞研究的前提，目前已發(fā)現(xiàn)了一些可能成為腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)記物，如CD44、CD24、CD133、ABCG2等，但這些標(biāo)記物是否可以成為宮頸

2、癌干細(xì)胞的標(biāo)記物，仍需要更多的研究來(lái)證實(shí)。本研究結(jié)合目前腫瘤干細(xì)胞的研究成果，對(duì)宮頸癌原代細(xì)胞進(jìn)行分離和培養(yǎng)，并采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD44和CD24在宮頸癌原代細(xì)胞中是否有表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)其在外周血中的表達(dá);此外，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化和免疫熒光雙染法定位檢測(cè)兩種標(biāo)記物在宮頸癌中的表達(dá)，以豐富實(shí)體瘤的研究。
　　方法:
　　收集2011年10月1日至2012年10月1日在河南省鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院行婦科手術(shù)的宮頸癌

3、患者標(biāo)本（包括癌組織和外周血），臨床分期(ⅠA～ⅡB期)16例，按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)分期標(biāo)準(zhǔn):ⅠA期4例、ⅠB期5例、ⅡA期4例和ⅡB期3例。癌組織病理類型為浸潤(rùn)性鱗狀上皮癌，患者中位年齡56歲(32～71歲);同期河南省鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科行子宮全切術(shù)的正常宮頸組織10例作為對(duì)照;患者中位年齡43歲(26～63歲)。

4、首先應(yīng)用蛋白酶消化法分離宮頸癌組織，然后用腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)分離出的懸浮細(xì)胞，培養(yǎng)一段時(shí)間后，因原代細(xì)胞雜質(zhì)較多，再用淋巴細(xì)胞分離液分離可得到較為純凈的細(xì)胞球。外周血的分離采用淋巴細(xì)胞分離液分離以獲得單個(gè)核細(xì)胞;然后應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD44和CD24在宮頸癌原代細(xì)胞及外周血中的表達(dá)情況，最后應(yīng)用免疫組化和免疫熒光雙染的方法檢測(cè)CD44和CD24在宮頸癌組織的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.宮頸癌原代培養(yǎng)過

5、程顯示:采用蛋白酶消化法和腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)能得到宮頸癌懸浮細(xì)胞球;但在正常宮頸組織無(wú)法得到懸浮細(xì)胞球。
　　2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD44和CD24，結(jié)果顯示在宮頸癌懸浮細(xì)胞球表面表和外周血中均有CD44和CD24表達(dá)，而且有CD44+單陽(yáng)，CD24+單陽(yáng)，CD44+CD24+雙陽(yáng)的細(xì)胞群;但在正常宮頸組織和健康對(duì)照者外周血中無(wú)CD44和CD24的表達(dá)。
　　3.免疫組化顯示:CD44和CD24表達(dá)于宮頸癌組