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文檔簡介
1、目的:在建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HTBD)模型的基礎(chǔ)上,探討他克莫司(tacrolimus,F(xiàn)K506)對HIBD新生大鼠是否具有神經(jīng)保護作用及其作用機制。 方法:正常7日齡Sprague-Dawley大鼠153只,隨機分為3組,假手術(shù)組49只、HIBD組(缺氧缺血組)53只、干預(yù)組(FK506干預(yù)組)51只,假手術(shù)組死亡1只,HIBD組死亡5只,干預(yù)組死亡3只,故進入實驗的三組均為48只。采用Rice等的方法建立新生大鼠
2、HIBD模型,干預(yù)組在缺氧后即刻腹腔內(nèi)注射生理鹽水稀釋的FK506 lmg/kg,連續(xù)注射3天;HIBD組腹腔內(nèi)注入等量生理鹽水。大鼠分別于缺氧完成后6h、12h、24 h、72h、7d、14d處死,灌注后腦組織常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色,免疫組化(Envision)法檢測海馬磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(p-extracellular signal-regulated kinase1/2,p-ERK)和生長相關(guān)蛋白(growth ass
3、ociated protein-43,GAP-43)的表達。Image-Pro Plus4.5圖像分析軟件對圖像陽性結(jié)果進行積分光密度值的測量,并對各組動物進行體格發(fā)育評估。SPSS11.0進行統(tǒng)計分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果: 1、腦組織HE染色光鏡觀察同假手術(shù)組比較,HIBD組缺氧缺血后6h~12h,少量神經(jīng)元水腫,細胞間隙增寬;24h神經(jīng)元水腫加重,部分神經(jīng)元變性、丟失;72h部分大鼠大腦皮層可見梗
4、死灶形成;7d膠質(zhì)細胞增生活躍,可見膠質(zhì)結(jié)節(jié)。干預(yù)組神經(jīng)元水腫、壞死較HIBD組減輕,未見明確梗死灶。 2、體格發(fā)育評估三組大鼠進入實驗時體重?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異(F=-2.216,P=-0.123)。以后各觀察點(缺氧缺血后72h、7d、14d)三組體重差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其中HIBD組體重最低,干預(yù)組體重低于假手術(shù)組,但高于HIBD組。三組大鼠死亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(確切概率值為2.754,P=0.252)。
5、 3、免疫組化假手術(shù)組海馬神經(jīng)元少量表達p-ERK;HIBD組、干預(yù)組海馬p-ERK的表達均在缺氧缺血后6h增加,于24h達到高峰,與假手術(shù)組相比,在6h、12h、24h和72h有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);干預(yù)組表達增加程度明顯高于HIBD組,在6h、12h、24h和72h有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。假手術(shù)組海馬GAP一43的表達隨日齡逐漸增加,至7d達到峰值;HIBD組、干預(yù)組海馬的GAP-43均在缺氧缺血后’72h表達增加,于
6、7d達到高峰,與假手術(shù)組比較,在72h、7d和14d有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);干預(yù)組在72h、7d增加的程度高于HIBD組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),在14d下降,與HIBD組沒有統(tǒng)計差異,但仍高于假手術(shù)組。 結(jié)論: 1、缺氧缺血后新生大鼠海馬p-ERK、GAP-43表達增加,且p-ERK開始活化時間和高峰時間均早于GAP-43,提示ERK的活化可能增加GAP-43表達。 2、FK506能改善HIBD
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