三種常用IBV商品弱毒疫苗對(duì)廣西主要流行毒株免疫保護(hù)作用的比較研究.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(infectious bronchitis，IB)是目前危害全球養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展的一種主要疫病，給世界養(yǎng)雞業(yè)造成了嚴(yán)重的損失。疫苗免疫為IB防控主要措施，目前養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)用較多的疫苗為H120弱毒苗，近年4/91和LDT3-A弱毒苗使用出現(xiàn)增多趨勢(shì)。研究表明，目前廣西大部分IBV流行株發(fā)生了變異，而且絕大多數(shù)流行株與目前常用疫苗株血清型不同。為了解目前常用的商品化弱毒疫苗對(duì)廣西IBV主要流行株的免疫保護(hù)作用，為選擇正確疫苗進(jìn)行免

2、疫預(yù)防提供參考，本研究選取廣西IBV優(yōu)勢(shì)血清型Ⅰ、Ⅱ型的代表性分離株GX-YL5、GX-GL11079以及與4/91血清型相同的血清Ⅴ型的GX-NN09032，對(duì)三種常用商品弱毒疫苗H120、4/91和LDT3-A進(jìn)行免疫保護(hù)作用的評(píng)價(jià)和比較。
　　三種商品弱毒疫苗H120、4/91和LDT3-A按照推薦劑量經(jīng)滴鼻點(diǎn)眼途徑對(duì)7日齡SPF雛雞進(jìn)行免疫，免疫后0、1、2、3周分別應(yīng)用間接ELISA和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血清IBV特異性抗體水

3、平和外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞百分含量，同時(shí)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)外周血中IL-1β、IL-6、IL-12的mRNA轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行檢測(cè)。免疫后3周應(yīng)用廣西IBV代表性分離株GX-YL5、GX-GL11079和GX-NN09032進(jìn)行交叉攻毒，攻毒后觀察21天，記錄各試驗(yàn)組的發(fā)病率、死亡率、臨床癥狀和剖檢病變，并進(jìn)行感染率和保護(hù)率的統(tǒng)計(jì);同時(shí)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)攻毒后5、14、21天各試驗(yàn)組雛雞氣管沖洗液和腎臟組織中的

4、IBV載量及氣管沖洗液中IL-1β、IL-6和IL-12的mRNA轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行檢測(cè)。
　　ELISA方法檢測(cè)結(jié)果表明，免疫后一周各免疫組開始產(chǎn)生抗體，H120和4/91免疫組在免疫后第二周抗體水平達(dá)到峰值，LDT3-A在免疫后第三周抗體水平繼續(xù)上升。免疫后三周內(nèi)各免疫組抗體水平與未免疫組比較差異極顯著(P＜0.01)或差異顯著(P＜0.05)，LDT3-A免疫組抗體水平顯著(P＜0.05)高于H120和4/91免疫組，H120免疫

5、組抗體水平略高于4/91免疫組，但差異不顯著(P＞0.05)。
　　流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，免疫后三周內(nèi)各免疫組CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞百分含量呈現(xiàn)不同程度的上升趨勢(shì)，均顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)高于未免疫組，4/91免疫組CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞含量在整體水平上要比LDT3-A免疫組高(P＜0.05)，而LDT3-A免疫組CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞含量在整體水平上與H120免疫組相當(dāng)。
　　應(yīng)用

6、實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)外周血中IL-1β、IL-6、IL-12的mRNA轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)結(jié)果表明，免疫后三周內(nèi)，各免疫組外周血中IL-1β、IL-6和IL-12的mRNA轉(zhuǎn)錄水平與未免疫組比較均出現(xiàn)不同程度的上調(diào)。整體水平上，4/91免疫組IL-1β、IL-6和IL-12的相對(duì)表達(dá)高于其他兩個(gè)免疫組，H120免疫組次之，LDT3-A免疫組較低。
　　免疫攻毒結(jié)果表明，4/91弱毒苗對(duì)三株廣西流行毒株的保護(hù)率達(dá)到75％-83.7％，L

7、DT3-A免疫組為66.7％-75％，而H120免疫組僅為41.7％-58.3％。病毒載量檢測(cè)結(jié)果表明，不同毒株攻毒后各免疫組雛雞氣管沖洗液和腎臟中IBV載量顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)低于未免疫攻毒組，4/91免疫組氣管沖洗液和腎臟組織中IBV載量最低，LDT3-A免疫組次之，H120免疫組比較高。另一方面，血清Ⅲ型的H120弱毒疫苗對(duì)血清型分別為Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ型的GX-YL5、GX-GL11079和GX-NN09032廣

8、西IBV分離株的免疫保護(hù)作用較弱，4/91弱毒疫苗對(duì)具有相同血清Ⅴ型的GX-NN09032有很好的免疫保護(hù)作用，對(duì)血清Ⅰ、Ⅱ型的GX-YL5、GX-GL11079的保護(hù)作用相對(duì)較弱。
　　攻毒后檢測(cè)結(jié)果表明，各免疫組雛雞氣管沖洗液中的IL-1β、IL-6和IL-12 mRNA轉(zhuǎn)錄水平在攻毒后5、14天均發(fā)生不同程度上調(diào)，總體水平上比未免疫攻毒組高，表明各免疫組氣管粘膜通過分泌細(xì)胞因子，從而發(fā)揮細(xì)胞因子功能作用進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)的能力有所

9、增強(qiáng)。
　　綜上所述，本課題研究表明，H120、4/91和LDT3-A商品弱毒疫苗均能夠有效刺激機(jī)體產(chǎn)生不同程度的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，從而不同程度地抵抗和消除IBV感染，同時(shí)能夠誘導(dǎo)分泌細(xì)胞因子，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用;4/91商品弱毒疫苗對(duì)IBV廣西主要流行毒株有較好的臨床保護(hù)作用和病毒抑制效果，LDT3-A弱毒疫苗的免疫效果和病毒抑制效果較4/91稍低，H120弱毒疫苗的臨床保護(hù)力和病毒抑制效果欠佳;4/91弱毒疫苗對(duì)同一血