4株布魯氏菌弱毒株對小鼠毒力及免疫保護力的評價.pdf

1、布魯氏菌病(簡稱布病)是由布魯氏菌(Brucella)引起的一種廣泛流行的、人畜共患的慢性傳染性疾病，不僅給畜牧業(yè)造成重大經(jīng)濟損失，而且嚴重危害著人類健康；另外，布魯氏菌還被用作生物恐怖武器，對國家安全世界的和平造成嚴重的威脅。近年來布病的發(fā)病率呈上升趨勢，布魯氏菌病的發(fā)病特點是一旦發(fā)病并轉(zhuǎn)入慢性就無法徹底治療。目前，接種疫苗是預(yù)防和控制布魯氏菌病流行的主要措施和手段。我國現(xiàn)有獸用布魯氏菌疫苗菌株有3種，分別為羊種布魯氏菌M5弱毒株、豬

2、種布魯氏菌S2弱毒株和牛種布魯氏菌S19弱毒株。20世紀70-90年代，這3種疫苗對我國布病疫情的防控起了至關(guān)重要的作用，迄今為止，這3種疫苗在我國仍然被廣泛使用，在一些歐美國家粗糙型流產(chǎn)布魯氏菌疫苗RB51(B. abortus RB51)主要應(yīng)用于牛布病的防治，并且被廣泛應(yīng)用，然而布魯氏菌病疫苗在不同國家、不同地區(qū)的應(yīng)用和報道不一，本實驗對目前市場化的4株疫苗進行評價，旨在對生產(chǎn)實踐提供一定的指導(dǎo)作用；同時由于RB51弱毒株的突變基

3、因尚不明確，因此對RB51與LPS相關(guān)的27個主要毒力基因進行測序分析，旨在為新型疫苗的研究提供一定的參考。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴4種布魯氏菌弱毒株對小鼠毒力及免疫保護力的評價。為系統(tǒng)比較我國現(xiàn)有布魯氏菌病疫苗株S19，M5和S2及國外廣泛應(yīng)用疫苗株RB51的毒力及免疫保護力的強弱，本實驗以上述4種疫苗株分別進行了以100:1的 MOI侵染小鼠巨噬細胞的胞內(nèi)存活實驗，發(fā)現(xiàn)在胞內(nèi)存活能力RB51>M5>S19>S2；以1×10

4、6CFU/只免疫昆明小白鼠，脾臟指數(shù)法測定細菌毒力，測定各組疫苗株在小鼠脾臟中的定居能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)M5≥S19>S2≥RB51；待疫苗株在小鼠體內(nèi)清除后，腹腔內(nèi)接種布魯氏菌強毒株2308以1×105CFU只進行攻毒檢測保護力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)M5的保護效果最好；分別分離免疫后第1-10周血清，ELISA檢測血清中IgG滴度及細胞因子IFN-γ的表達水平，檢測各個疫苗株的抗體隨時間的免疫消長水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IgG水平S2、M5組總體高于其他組，而各

5、組IFN-γ水平總體上差異不顯著（P>0.05）；虎紅平板凝集試驗(RBPT)和標準試管凝集試驗(SAT)檢測血清凝集狀況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)S2組、S19組抗體持續(xù)時間較其他組長；同時無菌采取免疫不同布魯氏菌疫苗株脾臟、肝臟、腎臟等組織做病理切片觀察病理學(xué)變化差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)M5組的病變較其他組最強。⑵布魯氏菌RB51弱毒株和2308菌株LPS相關(guān)毒力基因差異。粗糙型布魯氏菌RB51疫苗弱毒株是光滑型牛種布魯氏菌2308株通過體外或體內(nèi)連續(xù)傳代培

6、養(yǎng)得到的變異菌株，但目前對RB51菌株確切的自然突變機制還尚不清楚，為了弄清毒力致弱的RB51株是否是由于O側(cè)鏈不合成的原因所致，或者合成LPS的某些基因受阻或缺失或突變所引起，因此本實驗通過以RB51和2308菌株為模板進行PCR聚合酶鏈反應(yīng)，并對LPS主要的26個毒力基因進行分子水平的測序分析。通過同源性分析比對結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相對于2308株，RB51在其基因組wboA基因中插入了序列大小為844bp的序列，但其他毒力基因分析比對同源性