連接蛋白及其組成的間縫隙連接對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞藥物敏感性的影響.pdf

1、目的：體外分析骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMMSCs）及骨髓瘤細(xì)胞株RPMI8226連接蛋白-43（Cx43）的表達(dá)，觀察在共培養(yǎng)條件下兩者是否可形成功能性縫隙連接（GJIC）以及阻斷GJIC后BMMSCs對(duì)RPMI8226影響的是否發(fā)生變化；探討Cx43及其組成的GJIC對(duì)骨髓瘤細(xì)胞株RPMI8226細(xì)胞藥物敏感性的影響。
　　方法：采用RT-PCR及免疫組化法測(cè)定BMMSCs、RPMI8226中Cx43的表達(dá)；生長(zhǎng)曲線、PI標(biāo)記流式細(xì)

2、胞術(shù)（FCM）分析、AnnexinV/PI雙染法、多重液相蛋白定量技術(shù)（CBA）及 western blotting法測(cè)定 BMMSCs與 RPMI8226細(xì)胞共培養(yǎng)后對(duì)RPMI8226細(xì)胞增殖、周期、凋亡、細(xì)胞因子分泌及凋亡相關(guān)蛋白的影響；18α-甘草次酸（α-GA）阻斷兩者間縫隙連接（GJIC）后 RPMI8226細(xì)胞生物特性的變化及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果： BMMSCs及RPMI8226細(xì)胞均表達(dá)Cx43，共培養(yǎng)

3、24h后BMMSCs可促進(jìn)RPMI8226細(xì)胞增殖；保護(hù)RPMI8226細(xì)胞免受抗腫瘤藥物影響，明顯下調(diào)硼替佐米（Bortezomib，BTZ）誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡（p<0.05）；細(xì)胞周期分析提示處于S期的比例顯著增加（p<0.05）；阻斷兩者間GJIC后，BMMSCs促進(jìn)RPMI8226細(xì)胞增殖能力減弱（p<0.05），并可部分恢復(fù)對(duì)BTZ的敏感性，細(xì)胞周期分析處于S期的比例下降（p<0.05）。共培養(yǎng)24h后，上清液中IL-6、IL-1

4、0和TGFβ水平均較單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)增加（p<0.05），其中IL-6和IL-10水平較單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)顯著增加（P<0.01），而bFGF和IL-17水平共培養(yǎng)前后無(wú)明顯變化（p>0.05）；使用α-GA阻斷GJIC后，培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IL-6、IL-10和TGF-β水平明顯下降（p<0.05）；共培養(yǎng)后BMMSCs可使RPMI8226細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xl、Survivin、CyclinD1表達(dá)上調(diào)（p<0.05），加入α-GA阻斷G