微骨折結(jié)合未培養(yǎng)的自體骨髓單個核細胞修復(fù)全層關(guān)節(jié)軟骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的:隨著近年組織細胞工程學(xué)的發(fā)展,利用組織工程治療關(guān)節(jié)軟骨缺損已成為研究的熱點。但與臨床上已經(jīng)投入使用的技術(shù)相比,利用組織工程修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損是一項新技術(shù),由于其出現(xiàn)時間較短,技術(shù)尚未十分成熟,所以相關(guān)的臨床研究仍在不斷進行。而微骨折技術(shù)以其操作簡單,創(chuàng)傷小,并發(fā)癥少等優(yōu)點已成為目前臨床上修復(fù)膝關(guān)節(jié)軟骨缺損的一線治療選擇。本實驗旨在探討微骨折結(jié)合未培養(yǎng)的自體骨髓單個核細胞對關(guān)節(jié)軟骨缺損的修復(fù)效果,提供實驗數(shù)據(jù),從而更好的服務(wù)、指導(dǎo)臨床

2、工作。
　　 方法:1、分組及模型制備:取新西蘭大白兔40只,隨機分為A、B、C、D四組,每組各10只。于兔右膝股骨滑車中部建立軟骨缺損模型。A與C組均自兔左股骨遠端髓腔抽取5ml骨髓,分離提取自體骨髓單個核細胞。A組:軟骨缺損區(qū)造成微骨折后植入未培養(yǎng)的自體骨髓單個核細胞-自體纖維蛋白凝膠復(fù)合體;B組:軟骨缺損區(qū)造成微骨折后植入自體纖維蛋白凝膠;C組:軟骨缺損區(qū)植入未培養(yǎng)的自體骨髓單個核細胞-自體纖維蛋白凝膠復(fù)合體;D組:軟骨缺

3、損區(qū)植入自體纖維蛋白凝膠。2、觀察指標(biāo):術(shù)后8、12周各處死5只實驗動物,取右側(cè)股骨滑車部。行大體觀察,然后對標(biāo)本脫鈣后行石蠟包埋,常規(guī)切片,在光鏡下觀察包括HE染色和甲苯胺藍染色,根據(jù)wakitani評分標(biāo)準(zhǔn)評價標(biāo)本的修復(fù)效果并進行統(tǒng)計學(xué)分析,以及Ⅱ型膠原的免疫檢測。
　　 結(jié)果:1大體觀察:所有動物膝關(guān)節(jié)活動正常,傷口愈合好:膝關(guān)節(jié)無感染、滲液及粘連;關(guān)節(jié)腔內(nèi)關(guān)節(jié)液清亮,缺損區(qū)周圍軟骨無明顯磨損及骨贅形成。術(shù)后8周時,A組缺

4、損區(qū)的修復(fù)組織與周圍正常軟骨界限模糊、色澤相近。修復(fù)組織的表面較為光滑,并且具有一定的彈性。B組與C組外觀相似,修復(fù)組織呈淺黃色,質(zhì)軟,表面不光整,與周圍正常軟骨組織界限清晰。D組缺損區(qū)為纖維組織部分充填,仍有較大空洞。術(shù)后12周,A組修復(fù)組織表面光滑,完全填平缺損區(qū),有彈性,與周圍軟骨色澤相近,界限模糊不清。B組與C組相似,修復(fù)組織表面較光滑,與周圍的軟骨色澤相近,界限模糊不清。D組缺損區(qū)可見明顯的缺損,修復(fù)組織表面不平整。
　

5、　 2組織學(xué)觀察:術(shù)后8周時對各組標(biāo)本處理后在光鏡下觀察可見:A組修復(fù)組織表面較光滑,填充體與周圍兩側(cè)正常軟骨大部分完全結(jié)合。修復(fù)組織內(nèi)的細胞呈圓形或橢圓形,并已出現(xiàn)軟骨囊和軟骨陷窩。但與周圍正常軟骨間仍存在著一定的差別,主要表現(xiàn)為新生組織內(nèi)細胞排列紊亂,細胞數(shù)量較多。修復(fù)組織的甲苯胺藍異染性明顯。B組標(biāo)本光鏡下觀察缺損區(qū)可見纖維組織和大量空泡,修復(fù)組織與周圍組織的愈合差,軟骨細胞排列紊亂。C組標(biāo)本光鏡下所見與B組相似,但新生軟骨細胞

6、較多。D組標(biāo)本缺損區(qū)由薄層纖維組織覆蓋,修復(fù)組織與周圍組織的接合較差。術(shù)后12周,A組標(biāo)本修復(fù)組織為透明樣軟骨,其表面光滑,與兩側(cè)正常軟骨組織接合良好,細胞數(shù)目減少,呈現(xiàn)出柱狀排列趨勢。甲苯胺藍染色與周圍組織無明顯差異。B組與C組相似,修復(fù)表面不光滑,軟骨細胞排列不規(guī)則,其間仍有散在的纖維組織。與周圍軟骨組織的接合較差。修復(fù)組織甲苯胺藍異染性差。D組標(biāo)本缺損區(qū)主要由纖維結(jié)締組織充填,修復(fù)組織甲苯胺藍染色陰性。
　　 四組組織學(xué)評

7、分總體差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。術(shù)后8周、12周時,A組軟骨缺損的修復(fù)效果要優(yōu)于B、C及D組(P＜0.05);B、C組軟骨缺損的修復(fù)效果要優(yōu)于D組(P＜0.05)。各組12周時的軟骨缺損的修復(fù)效果均優(yōu)于6周。
　　 3Ⅱ型膠原免疫組化:A組術(shù)后8周,修復(fù)組織內(nèi)可見部分軟骨細胞胞漿呈黃褐色,Ⅱ型膠原染色呈陽性;術(shù)后12周時,A組修復(fù)組織中細胞呈圓形或橢圓形,呈現(xiàn)柱狀排列趨勢,Ⅱ型膠原表達呈強陽性。B組與C組相比,C組細胞質(zhì)