IKKβ-FOXO3A-VEGF信號(hào)通路在As2O3抑制腫瘤血管生成中的作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過觀察As2O3作用后胃癌MGC803細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVECs中IKKβ、FOXO3a和VEGF的表達(dá)變化，分析IKKβ-FOXO3a-VEGF信號(hào)通路在As2O3抑制腫瘤血管生成中的作用，探討As2O3抑制腫瘤血管生成的分子機(jī)制。
　　方法：以人胃癌MGC803細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVECs為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，給予4μmol/L As2O3處理，采用RNAi方法降低FOXO3a的表達(dá)。采用制備腫瘤條件培養(yǎng)基培養(yǎng)HU

2、VECs細(xì)胞的方法模擬腫瘤微環(huán)境，利用CCK-8方法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞增殖情況;采用MGC803細(xì)胞和HUVECs細(xì)胞共培養(yǎng)的方法模擬腫瘤微環(huán)境，用transwell方法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞遷移數(shù)目，matrigel實(shí)驗(yàn)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞體外小管形成情況;采用ELISA方法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF的表達(dá)含量;采用Western blot方法和RT-PCR方法，分別在蛋白和mRNA水平檢測(cè)IKKβ、FOXO3a和VEGF的表達(dá)。
　　結(jié)果：第一

3、部分:1.CCK-8結(jié)果:(1)與FOXO3a siRNA組(41±10)％相比，As2O3組和control siRNA組HUVECs細(xì)胞體外增殖抑制率分別為(65±2)％和(69±4)％，抑制率均增加(P＜0.05)。(2)與CM FOXO3a siRNA組(14±2)％相比，CM As2O3組和CM control siRNA組HUVECs細(xì)胞體外增殖抑制率分別為(33±1)％和(32±1)％，抑制率均增加(P＜0.05)。2.T

4、ranswell結(jié)果:(1)與control組(213.33±1.36)相比，As2O3組、control siRNA組和FOXO3asiRNA組HUVECs細(xì)胞遷移數(shù)目(96.78±1.68，105.66±7.69，140.84±5.10)均減少(P＜0.05);與As2O3組和control siRNA組相比，F(xiàn)OXO3a siRNA組細(xì)胞遷移數(shù)目增加(P＜0.05)。(2)與Co-control組(212.00±4.67)相比，C

5、o-As2O3組、Co-control siRNA組和Co-FOXO3a siRNA組HUVECs細(xì)胞遷移數(shù)目(80.00±4.91，92.44±5.60，134.33±6.17)均減少(P＜0.05);與Co-As2O3組和Co-controlsiRNA組相比，Co-FOXO3a siRNA組HUVECs細(xì)胞遷移數(shù)目增加(P＜0.05)。3.Matrigel結(jié)果:(1)與control組(28.44±0.39)相比，As2O3組、co

6、ntrolsiRNA組和FOXO3a siRNA組小管形成數(shù)目(7.89±2.50，10.44±3.02，17.36±9.09)均減少(P＜0.05); FOXO3a siRNA組較As2O3組和control siRNA組小管形成數(shù)目增加(P＜0.05)。(2)與Co-control組(27.78±1.35)相比，Co-As2O3組、Co-controlsiRNA組和Co-FOXO3a siRNA組小管形成數(shù)目(8.67±2.03，1

7、2.44±0.51，21.78±1.26)均減少(P＜0.05); Co-FOXO3a siRNA組較Co-As2O3組和Co-controlsiRNA組小管形成數(shù)目增加(P＜0.05)。4.ELISA結(jié)果:與control組相比，As2O3組和control siRNA組培養(yǎng)上清液中的VEGF含量均減少(P＜0.05);與As2O3組和control siRNA組相比，F(xiàn)OXO3a siRNA組培養(yǎng)上清液中的VEGF含量增加(P＜0.

8、05)。
　　第二部分:1.western blot結(jié)果顯示:(1) IKKβ激動(dòng)劑TNF-α作用下IKKβ蛋白表達(dá)量增加，而FOXO3a蛋白表達(dá)量減少，經(jīng)相關(guān)分析顯示兩者之間存在負(fù)性調(diào)節(jié)關(guān)系(r=-0.57，P＜0.05);(2)不同處理組FOXO3a蛋白與VEGF蛋白表達(dá)結(jié)果分析顯示二者存在負(fù)性調(diào)節(jié)關(guān)系（r=-0.59，P＜0.05）;(3)給予IKKβ激動(dòng)劑作用后VEGF蛋白表達(dá)量增加。2.RT-PCR結(jié)果與Western