人前列腺癌相關(guān)新基因PC-1啟動子的克隆與分析.pdf

1、PC-1基因是由該室周建光研究員發(fā)現(xiàn)并克隆的,該基因在雄激素非依賴性和高惡性程度的前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào);在前列腺組織特異性表達(dá);表達(dá)受雄激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑調(diào)控.目前對其在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)調(diào)控還不清楚,為此開展了PC-1基因啟動子的克隆與分析研究.首先用PCR方法從前列腺癌細(xì)胞染色體上獲得了PC-1基因翻譯起始位點(diǎn)上游5-kb的序列,將其克隆在表達(dá)載體pGL3-basic上,隨后克隆了一系列啟動子5′側(cè)翼缺失的表達(dá)載體.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞

2、發(fā)現(xiàn)5-kb啟動子區(qū)的轉(zhuǎn)錄活性最高,在雄激素撤除的培養(yǎng)條件下,該啟動子比前列腺特異性抗原6-kb啟動子的轉(zhuǎn)錄活性還高.研究發(fā)現(xiàn)5-kb的啟動子區(qū)表現(xiàn)出了較強(qiáng)的前列腺細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控的能力,這種特異性調(diào)控主要是由PC-1翻譯位點(diǎn)上游4kb~5kb的調(diào)控區(qū)來實(shí)現(xiàn)的,4kb~5kb的調(diào)控區(qū)還體現(xiàn)出了增強(qiáng)子的特征.另外還證明了在PC-1翻譯起始位點(diǎn)上游第345-359位15bp的堿基是雄激素受體反應(yīng)元件,該段序列缺失的啟動子失去了對雄激素的應(yīng)

3、答能力.實(shí)驗(yàn)證明p53能夠抑制PC-1啟動子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控能力.在前列腺癌LNCaP細(xì)胞中p53的抑制功能部分是通過PC-1啟動子上的雄激素受體反應(yīng)元件來完成的.而在惡化程度更高的前列腺癌C4-2細(xì)胞中p53對啟動子轉(zhuǎn)錄抑制的功能減弱了.可能這正是造成PC-1在這兩種細(xì)胞中差異表達(dá)的因素之一.PC-1基因5-kb啟動子的前列腺細(xì)胞特異性表達(dá)調(diào)控能力以及較高的轉(zhuǎn)錄活性,使其有望在前列腺癌的基因治療和建立前列腺癌轉(zhuǎn)基因動物模型中發(fā)揮作用.我們用