載99m锝靶向前列腺癌納米金膠囊的構(gòu)建及其體外實驗研究.pdf

1、目的:構(gòu)建載99mTc靶向前列腺癌的納米金膠囊,評估其對人前列腺癌PC-3細(xì)胞的體外靶向性及細(xì)胞毒性。
　　方法:通過兩步還原反應(yīng)制得中空的納米金膠囊:首先用納米鈷粒子還原氯金酸,然后以硼氫化鈉還原氯金酸;將99mTc包裹于中空的納米金膠囊(GoldHollowNanocapsules,GHNCs)中,然后通過與FA-PEG-SH反應(yīng)制備出FA-PEG-GHNCs-99mTc。然后進行:(1)FA-PEG-GHNCs-99mTc的

2、表征測定:分別用透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡觀察納米粒子的形態(tài)、表面形貌。(2)放射性配體結(jié)合試驗計算出Kd及Bmax:采用含不同濃度FA-PEG-GHNCs-99mTc(0.1nM、1nM、10nM、20nM、40nM、60nM、80nM、100nM)的細(xì)胞培養(yǎng)液作用于人前列腺癌細(xì)胞PC-3,待2h后棄舊培養(yǎng)基、PBS清洗、胰酶消化細(xì)胞后測定γ計數(shù)。(3)MTT法檢測其對前列腺癌細(xì)胞PC-3的細(xì)胞毒性:培養(yǎng)液中加入含不同濃度的(1n

3、M、10nM、20nM、40nM、60nM、80nM、100nM)的FA-PEG-GHNCs-99mTc溶液,并計算各組細(xì)胞的相對增殖率(RGD)值。(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度的FA-PEG-GHNCs-99mTc溶液是否誘導(dǎo)PC-3細(xì)胞凋亡:分為對照組與實驗組(20nM、40nM、80nM),共培養(yǎng)24h后,消化、離心、重懸,加入AnnexinV/PI試劑,以流式細(xì)胞儀分析樣品。
　　結(jié)果:1.結(jié)合試驗數(shù)據(jù)輸入GraphPad

4、PRISM5.0處理后得到平均Kd值為39.42nM,Bmax值為2202。2.PC-3細(xì)胞與不同濃度的FA-PEG-GHNCs-99mTc共培養(yǎng)24h后的細(xì)胞相對增值率(RGR)分別為105.174％、103.487%、105.999%、99.587%、90.251%、84.217%、80.278%。細(xì)胞毒性等級分別為0級、0級、0級、0級、Ⅰ級、Ⅰ級、Ⅰ級。3.PC-3細(xì)胞凋亡率(早期細(xì)胞凋亡率+晚期細(xì)胞凋亡率)分別為8.97%±1

5、.71%、9.71%±3.50%、10.37%±3.64%,與對照組細(xì)胞凋亡率9.28%±2.79%相比較,無顯著性差異。
　　結(jié)論:本研究合成的FA-PEG-GHNCs-99mTc納米金膠囊成功地與人前列腺癌PC-3細(xì)胞表面的葉酸受體結(jié)合,擁有很好的靶向性;其在較低濃度條件下對PC-3細(xì)胞無明顯毒性,也未引起細(xì)胞凋亡,具有良好的生物相容性。因此,在腫瘤靶向藥物運載和腫瘤靶向顯像,具有廣闊的應(yīng)用前景,為后期實施SPECT/CT顯像