柱狀黃桿菌的系統(tǒng)發(fā)育和生物學(xué)特性研究.pdf

1、柱形病是一種全球性的危害極廣的細(xì)菌性病，其病原為黃桿菌科的柱狀黃桿菌(Flavobacteriumcolumnare)。柱狀黃桿菌主要危害魚(yú)類的鰓組織，是引發(fā)細(xì)菌性爛鰓的主要病原之一，其在我國(guó)流行較廣且危害嚴(yán)重，是草魚(yú)(Ctenopharyngdonidellus)、鱖(Sinipercachuatsi)等重要養(yǎng)殖魚(yú)類的主要病原。本研究以我國(guó)分離的引起柱形病的病原為對(duì)象，對(duì)柱狀黃桿菌的系統(tǒng)發(fā)育及生物學(xué)特性進(jìn)行研究，為柱形病的防治奠定理論

2、基礎(chǔ)。 為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)柱形病在我國(guó)的發(fā)生情況，在發(fā)生柱形病的病魚(yú)中分離細(xì)菌性病原，經(jīng)過(guò)感染試驗(yàn)、五步法鑒定，并結(jié)合16SrDNA序列分析，證實(shí)柱狀黃桿菌(Flavobacteriumcolumnare)是所分離的爛鰓病的病原之一。同時(shí)，也證實(shí)，上世紀(jì)曾經(jīng)命名為爛鰓(gill-rot)病病原的魚(yú)害粘球菌(MyxococcuspiscicolaLu，Nie＆Ko，1975)是柱狀黃桿菌的同物異名。利用分離到的16株柱狀黃桿菌的16Sr

3、DNA序列，以及已經(jīng)發(fā)表的柱狀黃桿菌的相關(guān)序列，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，發(fā)現(xiàn)柱狀黃桿菌聚成三枝，與已經(jīng)報(bào)道的柱狀黃桿菌的三種基因組型(genomovar)相對(duì)應(yīng)，其中當(dāng)時(shí)命名為魚(yú)害粘球菌的強(qiáng)毒株G4與分別分離自日本和美國(guó)的兩株聚為一枝。第II和第Ⅲ枝包括的菌株較多，它們中的一些菌株來(lái)源于相同的魚(yú)類宿主，如鯉形目的種類；但是，這兩枝也包括一些特有的株，如從歐洲和美國(guó)的鮭形目種類上分離的柱狀黃桿菌聚在第II枝，這一枝還包括我國(guó)曾經(jīng)命名為魚(yú)害粘球菌的

4、G18弱毒株，從我國(guó)隸屬于鱸形目的鱖魚(yú)和鱘形目的中華鱘上分離到的柱狀黃桿菌則聚在第三枝。 以柱狀黃桿菌三個(gè)菌株：G4(基因組型I)、G18(基因組型II)、Z4(基因組型Ⅲ)為試驗(yàn)對(duì)象，測(cè)定各菌株的生化特性，觀察其在不同的溫度、鹽度、pH條件下生長(zhǎng)情況。結(jié)果表明：柱狀黃桿菌具有抗托普霉素、新霉素和氧化發(fā)酵蔗糖等生化特性，不能用neo作為該菌遺傳操作標(biāo)記；柱狀黃桿菌對(duì)NaCl和pH敏感，pH4.5，pH9.2，0.8％、1％、2％

5、NaCl處理時(shí)間超過(guò)30min，大部分條件下菌落數(shù)均極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)；將pH和NaCl結(jié)合試驗(yàn)，pH4.5，NaCl超過(guò)0.8％，浸泡時(shí)間長(zhǎng)于30min，三株柱狀黃桿菌均無(wú)菌落生產(chǎn)；G4、G18、Z4菌株在24-32℃生長(zhǎng)較好。G4在37℃，重現(xiàn)子實(shí)體，其形態(tài)與湖北省水生生物研究所魚(yú)病研究室描述一致，推測(cè)子實(shí)體是柱狀黃桿菌在適應(yīng)新環(huán)境時(shí)一種特殊菌態(tài)。 利用G4、Z4為參考菌，測(cè)定菌懸液的濁度值(OD600)并用平