廣西2種甘薯病毒(SPFMV與SPCSV)的CP基因序列分析及SPCSV抗血清制備.pdf

1、甘薯病毒病是廣西甘薯的主要病害之一。從廣西南寧、崇左、北海、玉林的甘薯種植區(qū)采集疑似甘薯病毒病樣品，通過RT-PCR法進(jìn)行甘薯羽狀斑駁病毒(Sweetpotato feathery mottle virus，SPFMV)與甘薯褪綠矮化病毒(Sweet potato chlorotic stuntvirus，SPCSV)的檢測，發(fā)現(xiàn)SPFMV、SPCSV在廣西普遍存在，當(dāng)甘薯單獨感染SPFMV與SPCSV時，表現(xiàn)的病毒病癥狀輕微，但甘薯同

2、時感染SPFMV和SPCSV時，表現(xiàn)出植株矮化、葉片皺縮等嚴(yán)重癥狀。
　　設(shè)計擴增SPFMV與SPCSV的CP基因的引物，通過克隆并測序分別得到18個SPFMV廣西分離物的CP基因序列和14個SPCSV廣西分離物的CP基因序列。SPFMV廣西分離物CP基因的核苷酸序列945bp，編碼315個氨基酸;SPCSV廣西分離物CP基因的核苷酸序列774bp，編碼257個氨基酸。其CP基因的序列分析結(jié)果表明:SPFMV廣西分離物存在O株系、

3、RC株系、EA株系，不存在C株系，其中O株系是SPFMV廣西分離物的優(yōu)勢株系;SPCSV廣西分離物只有WA株系，無EA株系。
　　將RT-PCR擴增得到SPCSV的CP基因克隆到pET30a(+)載體上，轉(zhuǎn)化于大腸桿菌BL21(DE3)pLysS，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)得到與預(yù)期大小一致的SPCSV CP的目的蛋白。經(jīng)純化回收后免疫兔子，獲得了SPCSV CP的抗血清。通過ELISA和Western Blot檢測，抗血清的效價達(dá)到1:6