養(yǎng)陰清熱理氣方及其拆方抑制人食管癌細(xì)胞EC9706 EGFR-PLC-γ1-PKCα信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究.pdf

1、目的：通過觀察養(yǎng)陰清熱理氣方(H)及各拆方當(dāng)歸、女貞子(Y)；天花粉、蚤休(Q)；旋復(fù)花、八月札(L)對食管癌細(xì)胞EC9706增殖抑制和EGFR-PLC-γ1-PKCa信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響，研究養(yǎng)陰、清熱、理氣法治療食管癌的機理，探討陰虛、熱毒及氣結(jié)與食管癌病變和EGFR-PLC-γ1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)系。 方法：采用人食管癌EC9706細(xì)胞為實驗對象，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長狀況，計算細(xì)胞抑制率，篩選出有效的藥物：用正交試驗優(yōu)選出療效

2、最好的方劑；設(shè)對照組和用養(yǎng)陰清熱理氣方及其養(yǎng)陰、清熱、理氣三個拆方處理細(xì)胞，在倒置顯微鏡下觀察EC9706細(xì)胞生長狀態(tài)改變，用Western blot檢測EC9706細(xì)胞：EGFR-PLC-γ<,1>-PKCa信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路各蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：①養(yǎng)陰清熱理氣方及各拆方對EC9706細(xì)胞增殖明顯抑制，對細(xì)胞形態(tài)作用明顯不同，養(yǎng)陰組細(xì)胞可見細(xì)胞皺縮，透光度減小，形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞間基質(zhì)呈現(xiàn)絲網(wǎng)狀，貼壁性變差；清熱組細(xì)胞表面逐漸粗糙

3、，繼而胞質(zhì)內(nèi)充滿多量顆粒狀物質(zhì)，然后出現(xiàn)空泡樣變化；理氣組細(xì)胞皺縮，細(xì)胞間隙加大，胞質(zhì)粗糙；全方組及其他拆方組細(xì)胞形態(tài)與清熱組、理氣組相似，培養(yǎng)基中可見有較多的細(xì)胞碎片。②養(yǎng)陰清熱理氣方及各拆方均能抑制EC9706細(xì)胞的生長，全方作用最強，隨藥物濃度的增加，對細(xì)胞生長抑制呈現(xiàn)劑量一效應(yīng)依賴關(guān)系。③人食管癌EC9706細(xì)胞可檢測到EGFR、PLC-γ1、PKCa蛋白分子的過度表達(dá)。④當(dāng)用IC50藥物劑量處理細(xì)胞時，養(yǎng)陰清熱理氣方及各拆方均

4、能抑制EGFR-PLCγ1-PKCa信號通路各蛋白表達(dá)水平，其作用強弱依次為：H>QL>QY>LY>Y>Q>L。 結(jié)論：①養(yǎng)陰清熱理氣方及各拆方均能明顯抑制人食管癌細(xì)胞EC9706的生長，全方組效果最好，養(yǎng)陰、清熱、理氣三法聯(lián)用具有協(xié)同作用。②食管癌發(fā)病和EGFR-PLC-γ1-PKCa轉(zhuǎn)導(dǎo)通路信號增強密切相關(guān)。③養(yǎng)陰清熱理氣方及各拆方均能下調(diào)EC9706細(xì)胞EGFR-PLC-γ1-PKCa信號通路各蛋白表達(dá)水平，養(yǎng)陰、清熱、理