兔VX2肝臟轉移瘤門脈血流動力學研究.pdf

1、目的:建立兔vx2轉移瘤模型,使用DSA及CT等影像設備,通過腹腔動脈造影、肝固有動脈造影、CT灌注成像探討肝轉移瘤的血液供應。通過觀察、分析TACE前后門靜脈的影像學表現(xiàn),研究TACE對兔肝vx2轉移瘤模型門脈血流動力學改變情況,以明確在TACE前后門靜脈是否參與轉移瘤供血。
　　 方法:
　　 1.試驗動物模型建立
　　 1.1 vx2細胞株制備將vx2瘤細胞接種于新西蘭大白兔后腿上段外側肌肉,2周左右接種處

2、可捫及一2cm×2cm實質性包塊。由耳緣靜脈迅速注入40mL空氣處死兔子。無菌條件下剝離腫瘤包塊,切取邊緣生長旺盛的魚肉樣組織置于盛有生理鹽水的平皿中,用眼科剪剔除豆腐渣樣壞死組織和結締組織。瘤組織制成細胞懸液。
　　 1.2 vx2瘤細胞懸液的制備在超凈臺上,將新鮮魚肉樣癌組織在生理鹽水內(nèi)用眼科剪剪碎,反復吹打,經(jīng)200目濾網(wǎng)篩過濾制成瘤細胞懸液,離心(1000 r/min)5 min,臺盼藍染色后活細胞計數(shù),調整細胞密度為1

3、×106/ml。
　　 1.3 肝vx2轉移瘤模型的建立:實驗動物術前禁食12h,用1％戊巴比妥鈉3ml/kg耳緣靜脈注射全麻,取仰臥位,固定四肢于手術臺上,上腹部備皮,常規(guī)消毒鋪巾,于劍突下2cm正中開腹約2-3cm長,暴露肝左葉,緩慢注入vx2細胞懸液0.3ml,注射完畢后快速拔針,在穿刺點處附上一小塊無菌明膠海綿塊壓迫止血。確認無出血及瘤細胞溢出后還納肝臟,逐層縫合。術后青霉素40萬u靜脈緩慢推注,1次/日,連續(xù)3 d。<

4、br>　　 2.實驗對象的選擇分別在種植后14天對肝vx2瘤灶行CT平掃加灌注掃描。肝臟平掃,掃描參數(shù):80kV,200mA,FOV14,層厚2.5mm,螺距0.969；灌注掃描采用高壓團注方式,造影劑碘海醇(320mg/ml)1ml/kg,速度為1 ml/s,延遲5s掃描,共掃描30S。在CT檢查明確為肝臟移植瘤的兔子中,選擇瘤灶體積大約為1.5-2.5cm門靜脈顯示清晰的10只兔子作為研究對象,符合率47.6％,其余11只種植成功

5、的兔子中門靜脈顯示不清的2例,瘤灶體積過大的5例(直徑大于3.5cm)瘤灶體積過小的4例(直徑小于1cm)。符合試驗條件的兔子在種植后第15天進行介入治療。
　　 3.介入治療
　　 介入治療選用的數(shù)字減影血管造影機為SIEMENS ANGIOSTARPlus。實驗兔麻醉、固定后,腹股溝區(qū)常規(guī)消毒鋪巾。在右側腹股溝區(qū)域股動脈搏動最強處沿股骨走形縱行切開皮膚,暴露股血管鞘,分離出股動脈長約2cm,用TERUMO公司生產(chǎn)的5

6、F導管鞘內(nèi)的穿刺套管針(18G)穿刺入股動脈,退出針芯,在鞘尾端迅速擰上Y閥防止出血,跟入TERUMOPROGREAT微導管及導絲,透視下尋找腹腔動脈。行腹腔動脈造影,對比劑應用碘的質量濃度為370m g/ml的優(yōu)維顯,延時注射1 s,采集速率3幀/秒。注射速率1ml/秒,注射劑量為6ml。注意觀察門靜脈顯示情況。后超選擇至肝固有動脈,行肝固有動脈造影注射劑量為3ml,注射速率0.5ml/秒.再超超選至瘤灶供血動脈進行栓塞治療。碘油使用

7、最大劑量1.5ml,實際使用劑量以透視下碘油無反流為注射標準。
　　 4.CT檢查
　　 所有進行介入栓塞治療的兔子均于vx2瘤株種植后兩周和介入栓塞術后及介入治療術后10-14天進行螺旋CT平掃以及灌注掃描。檢查采用美國GE公司Light Speed Pro32層螺旋CT機。由于介入栓塞后即時CT掃描腫瘤區(qū)域碘油沉積對門靜脈的顯示有較大影響,門靜脈顯示不清。選取種植后兩周和介入術后10-14天的CT灌注圖像作為此次試驗

8、的分析對象。
　　 5.CT及DSA圖像處理方法分別選取進行介入栓塞治療的兔子的vx2瘤株種植術后兩周和介入術后10-14天的CT灌注圖像,在灌注圖像中分別選擇腫瘤中心區(qū),正常肝實質區(qū)和門靜脈區(qū)將選好興趣區(qū)的CT圖像傳送至CT工作站,應用去卷積灌注軟件獲得腫瘤中心、門靜脈和正常肝實質興趣區(qū)時間密度曲線(TDC)；選擇腫瘤興趣區(qū)時要避開大血管。選取腹腔動脈造影門靜脈期序列圖像,每秒選擇一幅圖像,將DSA圖像傳輸至PC工作站,用SI

9、EMENS專用Quantcor Lva軟件將DICOM圖像轉換為TIF格式。再用PhotoShop進行定量分析。分別測量轉移瘤中心區(qū)域、門靜脈和腫瘤周邊正常肝實質灰度(K值,間接代表密度),并畫出時間密度曲線(TDC)。其方法是:用PhotoShop.cs打開圖像文件,在菜單欄中選取窗口,點擊下拉菜單中導航器,選取信息,在K:區(qū)域點擊跟蹤實際顏色值小圖標,在下拉菜單中選取灰度,用工具欄中的吸管工具,讀取興趣區(qū)K值百分數(shù)。純白區(qū)域為0％,

10、純黑區(qū)域為100％。
　　 6.病理檢查
　　 進行介入治療的兔子在其死亡后均剖腹探查,vx2肝癌是突出于肝表面結節(jié)樣的包塊,質地較硬,與正常肝組織分界不清,部分表面具有光澤,呈魚肉樣(圖1)。病理切片檢查顯示其病理類型為鱗癌(圖2)。
　　 7.統(tǒng)計學方法
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析,對栓塞前后灌注CT門靜脈峰值時間及門靜脈峰值(HU)采用配對t檢驗進行統(tǒng)計分析,p<0.05為差異有統(tǒng)計

11、學意義。
　　 結果:
　　 1.DSA表現(xiàn)腹腔動脈造影時肝固有動脈顯示清晰,門靜脈顯示清晰,腫瘤呈環(huán)形強化或片狀影。腹腔動脈造影動脈期為1-7s,門靜脈顯影時間為7-21s,從栓塞前腹腔動脈造影靜脈期TDC中可以看出門靜脈的密度(k值)峰值為41％～58％平均為(53.35±9.28)％,正常肝實質密度(K值)峰值31％～45％,平均為(38.17±4.26)％腫瘤中心密度(K值)峰值為37～50平均為(45.13±3

12、.03.)％。腫瘤中心密度表現(xiàn)為緩慢下降的趨勢,而正常肝實質密度則呈現(xiàn)持續(xù)緩慢上升的態(tài)勢,在14s以后,腫瘤中心的密度小于正常肝實質的密度。而門靜脈表現(xiàn)為先是緩慢上升的平臺,然后在10s后表現(xiàn)為快速上升期。此時門靜脈密度大于腫瘤中心區(qū)的密度。栓塞后腹腔動脈造影門脈期TDC表現(xiàn)同栓塞前無明顯變化(腫瘤中心密度(K值)峰值為24～41平均為(36.39±1.87)密度值與栓塞前相比有所下降主要受碘油沉積影響)。
　　 2.CT表現(xiàn)v

13、x2瘤株種植兩周后CT平掃時腫瘤多呈等或低密度區(qū),灌注掃描時動脈期表現(xiàn)為不均勻強化。靜脈期表現(xiàn)為瘤灶邊緣環(huán)形強化范圍擴大,所有CT掃描門靜脈均顯示良好。介入栓塞后即刻CT掃描由于腫瘤組織碘油沉積的影響門靜脈顯示不清無法測量其時間密度曲線。介入栓塞術后10-14天行CT平掃加灌注掃描,腫瘤區(qū)域仍有少量碘油沉積,動脈期表現(xiàn)為環(huán)形強化,門脈期時由于碘油大部被吸收門靜脈顯示受碘油影響較小,可顯示清晰。通過去卷積灌注軟件獲得栓塞前后門靜脈、腫瘤中

14、心、正常肝實質時間密度曲線。從栓塞前TDC中可得到門靜脈密度(HU)峰值為115-160平均為143,腫瘤中心密度(HU)峰值為68-92平均為76,正常肝實質密度(HU)峰值為83-121平均為106。從TDC中可以看出門靜脈表現(xiàn)為快速上升態(tài)勢,正常肝實質表現(xiàn)為緩慢上升,而腫瘤中心表現(xiàn)為緩慢下降或平臺期。介入栓塞后TDC與栓塞前TDC相比無明顯變化(腫瘤中心密度(HU)峰值為89-141平均為118,密度與栓塞前相比有所上升主要受碘油

15、沉積影響)。
　　 3.統(tǒng)計學分析:通過對栓塞前后門靜脈峰值(HU)進行t檢驗得出t=0.885 p=0.399(P>0.05)無統(tǒng)計學意義。通過對門靜脈峰值時間進行t檢驗得出t=0.287,P=0.78(P>0.05)無統(tǒng)計學意義。
　　 結論:
　　 1.CI、灌注掃描時門靜脈顯示清晰,選取vx2瘤株種植術后兩周和介入術后10-14天的CT灌注圖像,應用去卷積灌注軟件進行分析?？傻贸瞿[瘤中心區(qū)密度不隨門靜脈密

16、度的變化而變化,門靜脈在介入栓塞后仍不參與轉移瘤的供血。
　　 2.DSA腹腔動脈造影時,門靜脈顯示清晰,選取靜脈期序列造影圖像,通過PhotoShop軟件進行定量分析。通過TDC可以看出腫瘤栓塞前在靜脈期序列中門靜脈在1—6s時表現(xiàn)為高速上升態(tài)勢,在7-13秒表現(xiàn)為緩慢下降。正常肝實質在靜脈期表現(xiàn)為緩慢上升,腫瘤中心區(qū)表現(xiàn)為緩慢下降或平臺期。在腫瘤栓塞后由于碘油沉積的影響腫瘤中心區(qū)平均密度值大幅下降,但從時間密度曲線中仍然可以