兔VX2肝臟轉(zhuǎn)移瘤DS、MRI、CT與病理對照研究.pdf

1、目的:建立兔vx2肝臟轉(zhuǎn)移瘤模型,使用DSA及CT、MRI等影像設備,通過對兔vx2肝臟轉(zhuǎn)移瘤模型進行DSA及MRI、CT增強掃描,通過觀察,分析肝臟轉(zhuǎn)移瘤的影像學表現(xiàn)與病理學聯(lián)系。
　　 方法:
　　 1.兔vx2肝臟轉(zhuǎn)移瘤模型的建立
　　 1.1 VX2細胞株制備將瘤細胞接種于兔后腿上段外側(cè)肌肉內(nèi)成瘤并傳代。2周左右接種處可捫及一2cm×2cm實質(zhì)性包塊。由耳緣靜脈注入空氣處死兔子。嚴格無菌條件下剝離腫瘤,切

2、取包塊邊緣生長旺盛的魚肉樣組織置于盛有生理鹽水的平皿中,用眼科剪剔除豆腐渣樣壞死組織和結(jié)締組織。部分制成瘤細胞懸液待用。部分瘤組織放入凍存管內(nèi)按要求冷凍存放,待日后應用。(凍存液的制法:三種試劑由二甲基亞砜、胎牛血清、培養(yǎng)基按照1:4:5比例)
　　 1.2 VX2瘤細胞懸液的制備在超凈臺上,我們將魚肉樣癌組織用眼科剪盡量剪碎,在生理鹽水內(nèi)反復吹打,經(jīng)200目濾網(wǎng)篩過濾制成瘤細胞懸液,離心(1000 r/min)5 min,臺盼

3、藍染色計活細胞數(shù),配成1×106個細胞/ml的VX2細胞懸液,待種植。
　　 1.3兔肝VX2移植癌模型建立新西蘭大白兔50只,雌雄不限體重為2.5-3.0kg由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供。動物術(shù)前禁食12 h,用1％戊巴比妥鈉,3ml/kg耳緣靜脈注射全麻,取仰臥位,固定四肢于兔手術(shù)臺上,上腹部備皮,常規(guī)消毒鋪巾,于劍突下2cm正中開腹約2-3cm長,暴露肝左葉下緣,用生理鹽水蘸濕紗布塞到肝左葉下方,依靠紗布與肝的摩擦力拉出

4、肝左葉,在較厚的區(qū)域用1ml注射器針頭向肝門方向插入肝被摸下約0.5cm-1.0cm處回抽無回血時,再緩慢注入VX2細胞懸液0.3ml,注射完畢后快速拔針,在穿刺點處附上一小塊無菌明膠海綿塊壓迫止血,一方面減少瘤細胞溢出使腹腔種植；另一方面盡量使腫瘤種植在肝葉深部,可使瘤灶靠近較大血管支易于獲得血供。約半分鐘拿開明膠海綿塊看肝臟表面是否出血,確認無出血及瘤細胞溢出后還納肝臟,逐層縫合。術(shù)后腹腔內(nèi)注入青霉素40萬u,分兩層關腹,即腹膜與腹

5、肌一層,皮膚與皮下組織一層。術(shù)后青霉素40萬u靜脈緩慢推注,1次/日,連續(xù)3 d。
　　 2.影像學及病理學指標檢測與分析
　　 2.1 CT、MR檢查CT采用美國GE公司LightSpeed QX/i多層螺旋CT機,行CT平掃和動脈期、門靜脈期及延時期三期增強掃描。肝臟平掃,掃描參數(shù):80kV,120 FOV14,層厚2.5mm,螺距0.969mm,Pitch1:1；增強掃描采用高壓團注方式,延遲5s掃描,掃描24s。

6、造影劑碘海醇1ml/kg,速度為1ml/s。MRI應用德國西門子1.5T機掃描,序列采用T1WI,in-phase,SPGR(spoiledgradient-echo sequence),翻轉(zhuǎn)角80度。行MR平掃和動脈期、門靜脈期及延時期三期增強掃描。
　　 2.2據(jù)CT測量指標進行分組在種植后14天對肝VX2瘤灶行CT/MR平掃加增強掃描,每次掃描前動物禁食12 h,不禁水。全麻并固定在自制的檢查板上,共選出30只兔子作為研究

7、對象,采用數(shù)字表法完全隨機分為三組:每組10只。分別進行CT、MRI、DSA檢查。
　　 2.3 DSA檢查:經(jīng)股動脈超選肝總動脈插管造影介入治療選用的數(shù)字減影血管造影機為SIEMENS ANGIOSTARPlus。實驗兔麻醉固定后,腹股溝區(qū)常規(guī)消毒鋪巾。在右側(cè)腹股溝區(qū)域股動脈搏動最強處沿股骨走形縱行切開皮膚,沿股動脈分離皮下組織,鈍性分離肌肉組織,暴露股血管鞘,用刀尖劃開股動脈鞘,分離出股動脈長約2 cm,遠端用手術(shù)線結(jié)扎,近

8、端穿手術(shù)縫線備用。提緊遠端縫線,用5F自制血管套針穿刺入股動脈,抽出針芯,緩慢送入穿刺針鞘管約4-5cm,在鞘尾端迅速擰上3F動脈防漏套鞘,透視下隨后跟入TERUMO PROGREAT微導管及導絲,導絲頭端要長出導管頭約2.0cm,使管頭至胸12-腰1椎間隙水平,導管頭偏向右前方上下滑動尋找腹腔干,若腹腔干不易找出,可行腹主動脈造影,腹腔干造影注射劑量為:對比劑應用碘的質(zhì)量濃度為370g/L的優(yōu)維顯,延時注射1 s,采集速率3幀/秒。注

9、射速率1ml/秒,注射劑量為6ml。1ml/s,總量為5ml,壓力為300kpa。后超選擇至肝固有動脈,行肝固有動脈造影注射劑量為4ml,注射速率0.8ml/秒,經(jīng)造影證實腫瘤顯影。術(shù)畢拔除導管及鞘管的同時結(jié)扎股動脈近端及遠端,逐層縫合并包扎切口,介入術(shù)后預防感染方法同模型建立部分。
　　 2.4觀察指標記錄觀察對照組和實驗組CT、MRI及DSA造影影像表現(xiàn),統(tǒng)計歸類。記錄DSA瘤體體積、CT平掃與增強掃描(三期)瘤體大小、MR

10、平掃與增強掃描(三期)瘤體大小,腫瘤的數(shù)目,并觀察腫瘤周圍移行帶變化。與病理結(jié)果進行對照,記錄CT、MR及DSA發(fā)現(xiàn)病灶的數(shù)目。
　　 2.5病理檢查動物死亡后立刻開腹完整切取肝臟標本,記錄腫瘤體積大小和病理學表現(xiàn)。病理標本均同時包含癌組織和癌旁組織,實驗組以病灶邊緣殘存腫瘤部分為中心取材。10％的福爾馬林固定后石蠟包埋切片,切片厚度為4μm。行HE染色,觀察瘤組織大體及鏡下形態(tài)學,并與影像學表現(xiàn)進行對照。做病理大切片,低倍鏡觀

11、察腫瘤結(jié)構(gòu)。高倍鏡觀察腫瘤各個層次的結(jié)構(gòu),特別是瘤周強化的血管特征,觀察血管的密度以及觀察瘤周強化的血管特征。
　　 VX2瘤解剖與病理表現(xiàn):肉眼見肝內(nèi)腫塊呈蒼白色,無包膜,與周圍分界不清楚:突出肝外部分與腹腔種植腫塊表面凹凸不平,呈菜花樣。
　　 結(jié)果:VX2移植瘤種植成功22只,病理結(jié)果顯示成瘤29處。VX2移植瘤在CT及MRI上表現(xiàn)為占位性病變,呈類圓形或分葉狀低密度或低信號結(jié)節(jié),增強后發(fā)現(xiàn)富血供VX2移植瘤17處

12、,表現(xiàn)為腫瘤中度強化或明顯強化,腫瘤主體密度或信號明顯高于肝實質(zhì)。少血供肝移植瘤12處,腫瘤強化或輕微強化,腫瘤主體保持為低密度或低信號。富血供腫瘤明顯多于少血供腫瘤(P<0.01)。以病理學檢查做為金標準,CT、MR增強掃描、DSA發(fā)現(xiàn)病灶29處,CT平掃發(fā)現(xiàn)病灶23處,其中2處為假陽性,病理未發(fā)現(xiàn)腫瘤組織。MR平掃發(fā)現(xiàn)病灶28處,其中1處為假陽性。CT增強掃描、MR增強掃描、DSA的敏感性、特異性、準確性均為100％。肝VX2瘤影像

13、表現(xiàn):22只種植成功兔中發(fā)現(xiàn)病灶29個,其中16只1個病灶,5只2個病灶,1只3個病灶。病理示8只種植兔肝臟未發(fā)現(xiàn)病灶。種植后14天,CT及MR掃描組瘤體最大直徑(x±s)分別為(2.5±0.7)cm、(2.4±0.5)cm。CT增強掃描顯示腫瘤直徑大于CT平掃(p<0.05),MR增強掃描顯示腫瘤直徑大于MR平掃(p<0.05),CT及MR增強掃描顯示腫瘤直徑與大體病理無顯著性差異(p>0.05)。
　　 1.CT表現(xiàn):VX2

14、瘤株種植兩周后CT平掃時腫瘤多呈等或低密度區(qū),增強掃描時動脈期表現(xiàn)為不均勻強化。門靜脈期表現(xiàn)為瘤灶邊緣環(huán)形強化范圍擴大。延時期腫瘤周圍易行帶密度較門靜脈期減低。
　　 2.MRI:T1WI呈低信號;T2WI呈不均勻高信號。病灶邊緣較清楚。有1例顯示右側(cè)及左下腹部多個大小不等腫塊,最大約4cm×4cm,部分病灶與肝臟有明確分界。T1WI呈低信號,T2WI呈不均勻高信號,其內(nèi)見大小不等片狀相對低信號區(qū),病理檢查為鈣化灶。
　　

15、 3.DSA表現(xiàn):腹腔動脈造影時肝固有動脈顯示清晰,門靜脈顯示清晰,腫瘤呈環(huán)形強化或片狀影。腫瘤中心表現(xiàn)為緩慢下降的趨勢,而正常肝實質(zhì)則呈現(xiàn)持續(xù)緩慢上升的態(tài)勢,在14s以后,腫瘤中心的密度小于正常肝實質(zhì)的密度。而門靜脈表現(xiàn)為先是緩慢上升的平臺,然后在10s后表現(xiàn)為快速上升期。此時門靜脈密度大于腫瘤中心區(qū)的密度。
　　 4.CT掃描及DSA肝固有動脈造影顯示瘤灶直徑小于1.5cm的7處,瘤灶直徑在2-3cm的15處,瘤灶直徑大于