特布他林對(duì)A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸性粒細(xì)胞及分泌IL-6和IL-8的影響.pdf

1、嗜酸粒性細(xì)胞是支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制中的主要效應(yīng)細(xì)胞，與哮喘氣道炎癥、氣道重塑及氣道高反應(yīng)性有關(guān)，因而清除嗜酸粒性細(xì)胞對(duì)哮喘炎癥的控制起著重要作用。研究表明肺部嗜酸粒性細(xì)胞可通過(guò)凋亡后被巨噬細(xì)胞或氣道上皮細(xì)胞吞噬而被清除，由于它們是被完整地吞噬和清除，從而防止細(xì)胞內(nèi)炎性介質(zhì)和毒性內(nèi)容物的泄漏，對(duì)哮喘炎癥的控制具有重要意義。 β2-受體激動(dòng)劑是治療支氣管哮喘的有效藥物，近年來(lái)研究表明β2-受體激動(dòng)劑除具有舒張支氣管的作用外，還有一定的

2、抗炎作用，但具體機(jī)制不明。 已有文獻(xiàn)報(bào)道地塞米松可以上調(diào)上皮細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的能力，并存在濃度依賴效應(yīng)，而一些升高細(xì)胞內(nèi)cAMP水平的藥物也可以促進(jìn)細(xì)胞吞噬。對(duì)同為治療支氣管哮喘有效的藥物，β2-受體激動(dòng)劑是否可以對(duì)上皮細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞產(chǎn)生作用還不清楚。雖然已有文獻(xiàn)報(bào)道β2-受體激動(dòng)劑可以抑制一些炎性因子的分泌，但β2-受體激動(dòng)劑對(duì)上皮細(xì)胞吞噬凋亡的嗜酸粒性細(xì)胞的干預(yù)作用是否與抑制炎性因子的分泌相關(guān)還未見(jiàn)報(bào)道。研

3、究特布他林對(duì)上皮細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的作用及對(duì)IL-6、IL-8分泌的影響，目的是進(jìn)一步探討β2-受體激動(dòng)劑在治療支氣管哮喘中的作用機(jī)制。 目的： 1)探討特布他林對(duì)A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的作用，并了解有無(wú)濃度和時(shí)間依賴的關(guān)系。 2)觀察A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞后釋放IL-6、IL-8的變化情況。 3)探討特布他林對(duì)脂多糖刺激的A549細(xì)胞分泌IL-6、IL-8有無(wú)抑制作用，是否存在

4、濃度依賴關(guān)系。 方法： 用磁細(xì)胞分離柱和CD15、CD16免疫磁珠抗體分離正常人外周靜脈血中的嗜酸粒性細(xì)胞，培養(yǎng)48小時(shí)后通過(guò)形態(tài)學(xué)和AnnexinV-FITC凋亡試劑盒進(jìn)行嗜酸粒性細(xì)胞凋亡鑒定。凋亡嗜酸粒性細(xì)胞與不同時(shí)間、濃度特布他林干預(yù)的A549細(xì)胞共培養(yǎng)l小時(shí)，培養(yǎng)結(jié)束后凋亡嗜酸粒性細(xì)胞用鄰聯(lián)茴香胺進(jìn)行過(guò)氧化物酶染色，A549細(xì)胞用蘇木素加以核襯染。Olympus倒置顯微鏡及DiagnosticInstrument

5、s-Spot insight數(shù)字圖象采集攝像系統(tǒng)動(dòng)態(tài)觀察吞噬現(xiàn)象，光鏡下進(jìn)行吞噬率統(tǒng)計(jì)。A549細(xì)胞分別與凋亡嗜酸粒性細(xì)胞、脂多糖、脂多糖和不同濃度特布他林共培養(yǎng)，放射免疫法檢測(cè)上清液IL-6、IL-8的濃度。 結(jié)果： 1)A549細(xì)胞分別被特布他林干預(yù)1、2、3小時(shí)后，其吞噬能力隨時(shí)間延長(zhǎng)而下降。 2)A549細(xì)胞在特布他林以10μmol/L幾濃度干預(yù)時(shí)吞噬能力最低，且吞噬能力隨著濃度的降低而升高，但以0.1

6、μmol/L濃度干預(yù)時(shí)無(wú)顯著的抑制作用。 3)吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的A549細(xì)胞與未吞噬的A549細(xì)胞比較，IL-6和IL-8的分泌沒(méi)有顯著差異，但脂多糖顯著刺激A549細(xì)胞分泌IL-6和IL-8。 4)特布他林抑制脂多糖誘導(dǎo)的A549細(xì)胞分泌IL-6、IL-8，且存在濃度依賴關(guān)系。 結(jié)論： 1)特布他林以時(shí)間、濃度依賴的方式抑制A549細(xì)胞吞噬凋亡的嗜酸粒性細(xì)胞。 2)特布他林通過(guò)抑制炎性狀態(tài)下