整合素α4β7高親和性人源單克隆抗體的篩選和功能檢測(cè).pdf

1、整合素是一類(lèi)非常重要的細(xì)胞表面粘附分子，是由α和β兩個(gè)亞基組成的異源二聚體跨膜蛋白。作為細(xì)胞內(nèi)外的橋梁，整合素一方面負(fù)責(zé)介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)以及細(xì)胞與病原體的相互作用，另一方面可以雙向傳遞跨膜信號(hào)，這對(duì)于免疫反應(yīng)、免疫細(xì)胞的組織定位、凝血、組織愈傷、癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移以及組織和器官的發(fā)育等都至關(guān)重要。整合素α4β7是炎癥反應(yīng)病理過(guò)程中淋巴細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)的重要粘附分子，是一類(lèi)重要的淋巴細(xì)胞歸巢受體，主要表達(dá)在B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的表

2、面，通過(guò)與其配體MAdCAM-1(mucosaladdressincelladhesionmolecule-1)分子的相互作用，從而調(diào)控淋巴細(xì)胞在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的滾動(dòng)和粘附。
　　整合素表達(dá)或構(gòu)象的異常與炎癥反應(yīng)相關(guān)，炎癥性腸病（Inflammatoryboweldisease，IBD），IBD是一種結(jié)腸和小腸的炎癥，主要包括克羅恩病（Crohn'sdisease）和潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis)，在IBD發(fā)

3、生發(fā)展過(guò)程中往往伴隨有整合素α4β7表達(dá)的升高和異?；罨罨蟮恼纤卅?β7通過(guò)與其配體MAdCAM-1相互作用之后向下游的信號(hào)傳遞會(huì)加重炎癥的發(fā)展。因此，以整合素α4β7和其配體作為制藥靶點(diǎn)來(lái)治療炎癥性腸病成為了熱點(diǎn)，把能識(shí)別整合素α4β7的抗體作為藥物候選，用以治療相關(guān)疾病。所以，找到能特異抑制活化構(gòu)象的整合素α4β7對(duì)于IBD等炎癥的治療會(huì)起到好的療效，而找到能夠高親和性識(shí)別整合素α4β7的抗體是找到各種功能型抗體的前提，整合

4、素α4β7的高親和性抗體種類(lèi)的充實(shí)也會(huì)給研究帶來(lái)方便。
　　LJF9的scFv抗體片段是從人源噬菌體scFv抗體庫(kù)(TomlinsonI+J)篩選出來(lái)的，能識(shí)別整合素α4β7，且親和性較高。我們又將LJF9的重鏈和輕鏈可變區(qū)分別插入帶有人源IgG1重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的載體中構(gòu)建成全長(zhǎng)重鏈和輕鏈，共轉(zhuǎn)入真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)，proteinA柱純化得到了全長(zhǎng)單克隆抗體蛋白，最后用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)構(gòu)建的LJF9全長(zhǎng)IgG抗體對(duì)整合素α4β