甘草細(xì)胞及組織的保存技術(shù)研究.pdf

1、甘草享有“中藥之王”的美譽(yù)，近年來(lái)，人們大量的采挖導(dǎo)致甘草資源的極度匱乏。采用植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)利用甘草資源具有較大的優(yōu)越性，可以不受季節(jié)、地點(diǎn)限制，因而日異受到人們重視。但細(xì)胞的繼代培養(yǎng)具有一定的變異性，每次傳代都有可能導(dǎo)致甘草有效成分產(chǎn)量下降，這使細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)應(yīng)用受到阻礙。解決這一困難的最好方法就是將甘草細(xì)胞系進(jìn)行保存。論文成功的建立適合于甘草細(xì)胞保存的低溫與超低溫保存法，并對(duì)超低溫保護(hù)劑的機(jī)理進(jìn)行了初步研究。主要結(jié)果如下：

2、>　　 1、2，3，5-氯化三苯基四氮唑TTC法適合于甘草的脫氫酶活性測(cè)定，采用pH 7.6的緩沖液配置TTC 反應(yīng)液，丙酮作為提取劑，勻漿提取細(xì)胞內(nèi)的三苯基甲酯TF，具有較好的精密性和穩(wěn)定性。
　　 2、培養(yǎng)基的配方和保存溫度對(duì)細(xì)胞的低溫培養(yǎng)具有較大的影響。采用1/2 MS+30g/L 蔗糖作為保存培養(yǎng)基，4 ℃暗光保存甘草愈傷組織能長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月之久，但超過(guò)6個(gè)月細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)逐步下降，7個(gè)月時(shí)則不再生長(zhǎng)，并且保存后細(xì)胞次生代謝

3、產(chǎn)物的產(chǎn)量低于對(duì)照。
　　 3、超低溫保存法是目前用于細(xì)胞長(zhǎng)期穩(wěn)定保存唯一有效的途徑。慢速降溫法不適合于甘草的細(xì)胞保存，但是玻璃化保存法取得了較好的成果。結(jié)果顯示，選取14 d 齡的甘草懸浮細(xì)胞在含有60 g/L 蔗糖的MS 液體培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)2 d，室溫下25% PVS2 預(yù)處理10 min，0 ℃條件下100% PVS2 脫水15 min，投入液氮保存，48 h后再37 ℃水浴迅速化凍，用含有1.2 mol/L 蔗糖的MS