急性消化成年兔膝關節(jié)軟骨細胞及軟骨單位基因表達水平的研究.pdf

1、研究背景:軟骨細胞是關節(jié)軟骨最基本的解剖結構,其與細胞外基質(ECM)共同構成關節(jié)軟骨。然而,隨著解剖顯微鏡的應用及對關節(jié)軟骨研究的更加深入,有人提出軟骨單位(chondron)的概念,由1個或幾個串珠狀細胞形態(tài)周圍包裹一層細胞周基質(PCM)構成。國內外已有大量文獻報導了軟骨細胞及軟骨單位微管吸吮、生物力學檢測及單層培養(yǎng)的方法。然而從未從基因水平對其進行過系統(tǒng)研究,為此本文在國內外最新研究進展的基礎上,比較成年兔膝關節(jié)軟骨細胞及軟骨單

2、位基因表達水平的差異,從基因水平了解成年兔膝關節(jié)軟骨結構和代謝變化特點。
　　 目的:探討成年新西蘭大白兔膝關節(jié)軟骨細胞及軟骨單位(chondron)基因表達水平的差異。
　　 方法:取成年新西蘭大白兔5只,1％戊巴比妥鈉過量麻醉處死后獲取其雙側膝關節(jié)。左側膝關節(jié)采用0.4％Pronase酶和0.025％11型膠原酶序貫消化法消化為軟骨細胞,右側膝關節(jié)采用0.3％dispase酶和0.2％11型膠原酶聯(lián)合攪拌消化法消化為

3、軟骨單位。Trizol將其直接裂解后,運用RT-PCR的方法觀察其相關基因表達水平的差異。包括:基質蛋白(AGG,Co1-1A1、A2,Col-6Al、A6,Col-2、10、11)、基質金屬蛋白酶及抑制因子(MMP-1、3、9、13,TIMP-1、2、3)、細胞因子(IL-lb、TNF-a)、單個大分子及細胞骨架蛋白(Sox-9、Vinculin、Tubulin、Actin)。
　　 結果:(1)AGG、Co1-2、10、11

4、在成年兔膝關節(jié)軟骨細胞及軟骨單位中表達均較高;(2)AGG、Co1-2、Col-6、Co1-1O及TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、Vinculin、Tubulin在軟骨單位中表達較軟骨細胞高,差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);(3)MMP-1、MMP-13、IL-1b、TNF-a在軟骨單位中表達較軟骨細胞低,差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);(4)Co1-1、Co1-11、MMP-3、MMP-9、Sox-9、Actin在軟

5、骨細胞及軟骨單位中表達未見明顯差異(P＞O.05)。
　　 結論:AGG、Co1-2、Co1-10及Co1-11在關節(jié)軟骨中有特異性,軟骨單位與軟骨細胞相比,其表達關節(jié)軟骨正相關因子(AGG、Co1-2、Co1-6、Co1-10及TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、Vinculin、Tubulin)的能力較軟骨細胞強,而表達關節(jié)軟骨負相關因子(MMP-1、MMP-13、IL-1b、TNF-a)的能力較軟骨細胞差,軟骨單位較