基因改造K細(xì)胞治療Ⅰ型糖尿病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文利用糖反應(yīng)性的啟動(dòng)子和人胰島素基因改造K細(xì)胞，使其分泌有生物活性的成熟胰島素并能夠受葡萄糖的調(diào)控，探索代替胰島素注射或胰島移植治療Ⅰ型糖尿病的方法。 方法：將大鼠糖依賴性胰樣多肽(GIP)啟動(dòng)子插入以螢蟲素酶為報(bào)告基因的載體pGL3-Basic，構(gòu)建pGL3-Basic-GIP表達(dá)質(zhì)粒，通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞測(cè)定螢蟲素酶活性。將人胰島素基因置于GIP啟動(dòng)子控制下，構(gòu)建重組質(zhì)粒pCDNA3-GIP-hIns，經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染小鼠的腸

2、道內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞系STC-1(K細(xì)胞的體外研究模型)，篩選穩(wěn)定表達(dá)胰島素的細(xì)胞株。改變單克隆細(xì)胞株培養(yǎng)液中葡萄糖濃度，RIA法檢測(cè)胰島素的表達(dá)。鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病裸鼠模型，將基因改造過(guò)的細(xì)胞株以1×107移植到糖尿病裸鼠皮下，監(jiān)測(cè)裸鼠血糖、體重及胰島素水平變化。 結(jié)果：螢蟲素酶活性測(cè)定證實(shí)葡萄糖上調(diào)GIP啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性，質(zhì)粒pCDNA3-GIP-hIns轉(zhuǎn)染STC-1細(xì)胞，篩選共得到22株表達(dá)不同水平胰島素

3、的單克隆細(xì)胞(0～157.241uIU/ml/106cells/d)。當(dāng)基因改造過(guò)的細(xì)胞被移植到STZ誘導(dǎo)的糖尿病裸鼠體內(nèi)，7只移植STC-1—2細(xì)胞的治療組糖尿病裸鼠血糖下降至正常范圍，體重恢復(fù)；而移植空載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞的對(duì)照組糖尿病裸鼠血糖始終維持在較高水平，體重持續(xù)下降。糖耐量實(shí)驗(yàn)顯示治療組裸鼠利用糖的能力恢復(fù)正常，糖耐量曲線和正常組相似。 結(jié)論：上述結(jié)果表明人胰島素基因和糖反應(yīng)性GIP啟動(dòng)子構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染STC-1細(xì)胞，能夠